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鐵桿木蟲 (著名寫手)

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[求助] 熒光定量qPCR的問題

問個(gè)問題 qPCR是二步法準(zhǔn)還是三步法準(zhǔn)啊
我有做了相同模板的3次實(shí)驗(yàn)，其中第一次是用的sybr green 酶A(transgene)的，用的2步法，加ROX, 擴(kuò)增出來的Control和藥物處理組數(shù)據(jù)有顯著差別；
第二次是用的sybr green 酶B(genestar)的，用的3步法，加ROX, 擴(kuò)增出來的Control和藥物處理組數(shù)據(jù)也有顯著差別；
第三次是用的sybr green 酶A(transgene)的，用的3步法，加ROX, 擴(kuò)增出來的Control和藥物處理組數(shù)據(jù)無顯著差別了，但這次的溶解曲線反而最好，每個(gè)孔出來的都是一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的尖峰；那么我該信任哪次的數(shù)據(jù)？

注：（第一次和第二次都不是那種1-2倍的差別而是20倍以上的差別）

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1樓 2014-09-18 22:58:53

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