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求大俠解惑重組質(zhì)�？莶輻U菌轉(zhuǎn)化
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我在大腸桿菌中做了質(zhì)粒重組，質(zhì)粒pcr，質(zhì)粒雙酶切都說明質(zhì)粒重組正確，枯草轉(zhuǎn)化的時(shí)候平板陰陽對(duì)照正常，轉(zhuǎn)化菌株也有長出，但是菌落pcr和菌液pcr都沒有結(jié)果，pcr都有空載陰性對(duì)照和陽性對(duì)照，都沒問題。 請(qǐng)各位大俠分析下原因！！！！�。�！拜托拜托  PS菌落pcr是菌落加入25微升水，煮沸10min，模板25微升體系加入1.25微升菌液；菌液pcr過夜活化，取500微升菌液煮沸20min，模板加2.5微升。前一天菌落pcr后跑膠，有微量目的條帶，但與對(duì)照比較弱，今天菌液pcr又沒結(jié)果了。 問下，枯草菌落pcr需要加溶菌酶先溶解嗎？據(jù)師兄說是不需要。 |
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