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tinychan新蟲 (初入文壇)
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[求助]
菌液PCR引物問題 已有8人參與
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請(qǐng)問各位大牛，在菌液PCR中，我的空質(zhì)粒和重組質(zhì)粒用同一對(duì)引物P出了差不多大小的片段，這樣正常嗎？這對(duì)引物可以作為重組質(zhì)粒驗(yàn)證的引物嗎？（PS.電泳圖前六個(gè)為重組質(zhì)粒，后面四個(gè)為空質(zhì)粒。 20140924_201051.jpg |
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koujie1986
銅蟲 (初入文壇)
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chenguestc
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-09-25 21:37:04
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-09-25 21:37:04
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首先得看你的插入片段長度是多少，如果插入片段很短，當(dāng)然空載和重組中擴(kuò)增出片段差別就不大。 從圖上看，兩者沒有區(qū)別。但是MARKER跑的也不是特別開，因此，我建議您用高濃度膠相對(duì)低一點(diǎn)電壓多跑一會(huì)，看是否兩者有差異。其次，你得鑒定一下重組質(zhì)粒是否真正鏈接成功，用空載和重組質(zhì)粒跑一個(gè)電泳，看二者是否有長度上的差異。然后再做菌落PCR |
5樓2014-09-25 14:07:50
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