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chicktrick鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
感受態(tài)細(xì)胞相關(guān)問題 各種姿勢(shì)求指點(diǎn) 已有4人參與
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| 我最近剛開始做感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，用的膠回收dna 與takara的pmd18-t盒子進(jìn)行轉(zhuǎn)化，感受態(tài)細(xì)胞是購(gòu)買的成品。dna與載體鏈接之后加入感受態(tài)細(xì)胞，熱激處理，然后加入含有amp的LB培養(yǎng)基中搖菌培養(yǎng)一小時(shí) 之后涂板。 涂板結(jié)果是有很多零散單菌落，但是驗(yàn)證的時(shí)候全部為假陽性。后來老師指出在熱激處理之后搖菌不應(yīng)該使用加入amp的培養(yǎng)基。 現(xiàn)在我的疑問就是先前操作得到的單菌落是什么，如果是污染的話 為何菌落可以分辨出明顯的涂板痕跡（可能是沒涂開的原因可以看見許多單菌落連成一條線） 如果不是雜菌污染的話為何感受態(tài)細(xì)胞可以在amp的平板上生長(zhǎng)。 |
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4樓2014-09-30 11:00:04
for5
木蟲 (正式寫手)
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2樓2014-09-30 10:45:22
koujie1986
銅蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-09-30 12:33:05
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我覺得單菌落就是污染。 感受態(tài)細(xì)胞要在amp的平板上生長(zhǎng)首先需要載體轉(zhuǎn)入后表達(dá)氨芐抗性，無amp搖菌1h就是為了給菌時(shí)間用來表達(dá)抗性和增加菌群數(shù)量。 不曉得你們實(shí)驗(yàn)室對(duì)克隆平板是咋個(gè)處理的，培養(yǎng)抗氨芐細(xì)菌的平板到處亂扔很容易造成室內(nèi)空氣污染，涂板子操作不小心很容易長(zhǎng)雜菌的。 閑話一句，當(dāng)年我在克隆實(shí)驗(yàn)室里喝了杯水，結(jié)果回去狂拉肚子，吃頭孢才壓下去。你說這個(gè)抗氨芐的菌污染厲不厲害？ |
3樓2014-09-30 10:50:01
5樓2014-09-30 11:02:41
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