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syn1985木蟲 (正式寫手)
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[求助]
要表達的蛋白 基因序列擴出兩個長度的正確片段 給跪了 求問各位大神 已有2人參與
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小蟲是做絲狀真菌基因表達的，前一段時間做了個基因，用一對引物從mRNA中擴增出來了兩個片段A和B，就全部連接到T載體上送去測序，本想著有一個肯定是錯配，結果測序結果發(fā)現(xiàn)A和B都是目的片段，引物都可以比對上，只是A比B少剪切了一段序列，長度在200bp（在5‘端），我將這兩段序列用軟件翻譯了一下，編碼框不一樣：A是+3 B是+1，兩個編碼的蛋白只在N端有20個AA不一樣，其他都一樣，用NCBI找了保守區(qū)也是相同的。 我現(xiàn)在不知道應該嘗試表達哪一段序列，這兩段不太一樣的序列有說明了什么 |
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syn1985
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9樓2014-10-04 22:26:15
【答案】應助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
syn1985: 金幣+1, 謝謝 2014-10-04 15:17:14
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2014-10-04 22:01:41
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2014-10-04 22:01:41
| 我做植物基因克隆也碰過類似情況，可能原因是 一個基因簇或者基因家族里的兩個基因在DNA序列上串聯(lián)排列，并且高度同源，所以你用一對引物，有概率把兩個都克隆出來了，這種情況就是一個基因家族的兩個成員。要么就是生物中基因復制現(xiàn)象，就是一個基因在基因組中發(fā)生復制擴張，那么兩個就是一個基因。還有情況就是錯配了。 你可以提高溫度看看結果如何，然后把其他真菌中克隆的類似基因與之對比，看看通過保守結構域分析 能不能區(qū)別兩者差異 |
2樓2014-10-04 15:10:19
syn1985
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3樓2014-10-04 15:14:35
liuderong
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4樓2014-10-04 15:49:56
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