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小木可鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
單酶切跟雙酶切電泳條帶一樣，且都比空質(zhì)粒跑的快，什么原因？ 已有4人參與
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用PBI121質(zhì)粒進(jìn)行SmaI和XbaI雙酶切，跑電泳回收時，發(fā)現(xiàn)酶切片段跑的比空質(zhì)粒快。然后我又分別用兩種酶做單酶切，跑電泳，發(fā)現(xiàn)單酶切和雙酶切跑的位置一樣，而且都比空質(zhì)粒跑的快，這是什么原因呢？我上大二，目前真心搞不明白，求大神指導(dǎo)。圖中從左到右依次是：marker 空質(zhì)粒 SmaI XbaI SmaI+XbaI 2014.10.5.HZK1..jpg |
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jurkat.1640
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2樓2014-10-06 09:28:57
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小木可: 金幣+1 2014-10-06 17:21:33
| 質(zhì)粒分三型：閉環(huán)，開環(huán)，線性。大部分情況下，的確都是閉環(huán)跑得比線性快。但是，下列幾個因素的結(jié)合，可以導(dǎo)致閉環(huán)比線性跑得慢：高濃度膠，高電壓，膠中 EB 濃度正好合適。更多知識，可參考盧圣棟主編的“現(xiàn)代分子生物學(xué)實驗技術(shù)”。 |
4樓2014-10-06 10:59:31
小木可
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6樓2014-10-06 16:44:32
小木可
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7樓2014-10-06 17:19:43
永遠(yuǎn)一片天
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【答案】應(yīng)助回帖
| 環(huán)狀質(zhì)粒由于特殊的共價閉合結(jié)構(gòu)，不能按照一般的線性DNA觀察電泳，環(huán)狀閉合質(zhì)粒比一般線性DNA跑的慢，線性質(zhì)粒跑的快，提取質(zhì)粒時純化的好的話會出現(xiàn)兩條帶，有時會出現(xiàn)三條帶，均屬于正常情況。酶切后，質(zhì)粒被打開，變成線性雙鏈DNA，自然會跑的較快，之所以你的單酶切和雙酶切條帶大小一樣，是因為你的兩個酶切位點相近，都處在質(zhì)粒集中酶切位點的那段序列上，單酶會產(chǎn)生一個線性條帶，雙酶切切開后會產(chǎn)生兩個條帶，一個大條帶，一個小條帶，大條帶跟單酶切大小相似，所以難以分清高低，雙酶切產(chǎn)生的小條帶實在太小，基本看不到。 |
8樓2014-10-19 10:32:54
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