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電風(fēng)扇魏哥金蟲 (正式寫手)
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[求助]
雙抗夾心ELISA方法的建立 已有6人參與
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我做雙抗夾心ELISA時遇到下面的情況，求高手指教“一抗+5%的脫脂奶粉封閉+陰陽血清及空白對照+自己標(biāo)記的HRP二抗+顯色+終止“，結(jié)果陰性和空白都呈陽性，能不能幫忙分析分析是什么原因造成的？？？？？？？？？？ 一抗和二抗都是由本實驗室自己制備的！ |
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feiguyuan
新蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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電風(fēng)扇魏哥: 金幣+1, ★★★很有幫助 2015-05-04 14:53:43
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電風(fēng)扇魏哥: 金幣+1, ★★★很有幫助 2015-05-04 14:53:43
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第一，你的陰性血清是從哪里來的？這些東西不能自己隨隨便便制備，需要從正規(guī)科研所購買 第二，你的二抗是是否確實標(biāo)記上了，是否驗證能否顯色，可能是你中間的步驟不合理，我們沒有看到這個關(guān)鍵的標(biāo)記步驟不能隨便下結(jié)論 第三，你的顯色液是否用二抗證明有顯色，如果沒有，可取少量顯色液加入少量二抗證明之 第四，你的包被蛋白用的包被液是什么成分，一般情況下是碳酸鹽 ，另外是否證明已經(jīng)包被上了？ [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
3樓2014-11-15 07:25:59
biotech_zhou
木蟲 (著名寫手)
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2樓2014-11-14 21:01:54
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空白都顯陽性首先確定你這組實驗錯誤。 原因第一：加二抗后洗了沒。 第二：如果洗了，那就說明二抗交聯(lián)上去了，有可能封閉液過期了，或者封閉液沒有封閉上(時間，溫度等）。 第三：很多時候有一些抗體會出現(xiàn)一抗與二抗直接交聯(lián)的情況（應(yīng)該很上吧，但我就碰到過一次，實在洛陽百泰科買的）。 第四：你必須確定你空白是不是加錯了。 第五：顯色劑變質(zhì)了，我最開始做的時候TMB自配就出現(xiàn)過這種問題，它自己都變色了。 如果你的實驗操作正確的話，應(yīng)該是沒封閉好吧（或者你的脫脂奶風(fēng)有問題啊，買點BSA 試試便宜的。其它原因你在做實驗的時候很容易就發(fā)現(xiàn)了。 |
4樓2014-11-18 11:14:21
sfeqhl
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5樓2014-11-19 18:10:09
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