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暖陽ny2

新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 25.5
散金: 7
帖子: 21
在線: 6.2小時
蟲號: 2021208
注冊: 2012-09-22
專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)

[求助] 幫忙看下電泳圖，為什么沙門菌PCR后沒有條帶

如圖所示，圖1：孔1 是2000的Marker,孔2,3 是試劑盒提的沙門菌DNA（0.5μL）的PCR結(jié)果，孔4-7是煮沸法提金葡菌DNA的PCR結(jié)果，兩者用相同的PCR體系和條件
圖2：孔1 是2000的Marker,孔2-5是降低沙門菌DNA量（0.1μL）（為之前的1/5）后PCR結(jié)果，孔6是沙門菌總DNA結(jié)果，孔7為15000Marker
1、引物
16S (F)  5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'
16S (R)  5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'
2. PCR擴(kuò)增體系：
在0.2 mL Eppendorf管中加入1μL DNA，再加入以下反應(yīng)混合液：
  16S (F)          1μL (10μM)
  16S (R)          1μL (10μM)
  10×PCR Buffer    5 μL
  dNTP             4 μL
  Taq酶             0.5 μL
加ddH2O使反應(yīng)體系調(diào)至50 μL，簡單離心混勻。（體系等比例減半）
3. PCR反應(yīng)
擴(kuò)增條件為：
94℃          3 min
94℃          30 sec
50℃          45 sec 35 cycles
72℃          100 sec
72℃          7 min

圖1

圖2

回復(fù)此樓

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1樓 2014-11-20 21:52:18

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