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conanyangqun新蟲 (初入文壇)
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[交流]
探討質�？焖偬崛〉姆椒ê蛦慰寺】焖勹b定 已有4人參與
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20141122更新： 現(xiàn)在本蟲做菌落鑒定一般都是先做菌p，后挑菌提質粒酶切鑒定。感覺做下來耗時很長。逛了下論壇，感覺是不是可以直接搖菌，然后電泳菌液和空載。后根據(jù)電泳結果快速提質粒酶切鑒定�，F(xiàn)在就是質�？焯岱椒ㄟ�沒定好。 大家有啥好的方法嗎？只想快速鑒定單克隆是否正確。 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~分割線~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 首先聲明，本蟲只是想知道一下大家都有哪些快速提取質粒的方法，所以來開個帖子問問。  本蟲一直在用的方法就是堿裂解法，一般溶液I（RNase A plus）、II、III后，氯仿抽提蛋白，后無水乙醇放-20沉淀20-30min。然后再用70%乙醇洗滌。晾干后，水回溶。 最近做原生質體的時候看到sheen lab有個10min質粒提取的方法，網(wǎng)址請猛戳：http://molbio.mgh.harvard.edu/sheenweb/protocols_reg.html。 英語不才就不在這里丟人啦…… 他的方法原理應該就是 苯酚/氯仿/異戊醇 抽提吧。RNA是用最后ddw（RNase）消除。 本蟲搜索了下，也有人用水重懸菌體然后苯酚/氯仿/異戊醇抽提后異丙醇沉淀的。 所以，想問問大家，都在用啥快速提取質粒的方法。提取質量好，時間又比較短呢。請大家不吝賜教啦…… [ Last edited by conanyangqun on 2014-11-22 at 03:59 ] |
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