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zwt369銅蟲 (小有名氣)
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細(xì)胞上清中蛋白的純化
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最近在做細(xì)胞上清中的總蛋白純化。 上清是有血清的,第一步用85%的硫酸銨沉淀(加固體),離心后沉淀溶解過G-25凝膠柱置換緩沖液、脫鹽、除色。 這邊有幾個(gè)疑問,忘有經(jīng)驗(yàn)的各位大俠能給解答 1. 細(xì)胞上清中有哪些跟蛋白無關(guān)的雜質(zhì)? 2. 硫酸銨沉淀一般除去的是什么成分?(脂質(zhì)?多糖?多肽?.....) 3. G-25除鹽以后在鹽峰后還有一個(gè)紫外吸收峰,不知道是什么成分(激素?氨基酸?),做過核酸電泳證實(shí)沒有核酸。 4. 最后過柱完的蛋白樣品檢測(cè)還是有核酸,只是比初始上清中的減少一點(diǎn),怎么去除核酸對(duì)蛋白沒有損傷又不會(huì)混入污染物? 5. 粗純化的步驟需要改進(jìn)嗎?是否第一步需要將核酸去除? |

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