 |
 |
 |
| 24小時熱門版塊排行榜 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1759 | 回復(fù): 6 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
[求助]
強疏水性蛋白跑非變性蛋白電泳不易進膠 已有2人參與
|
||||
| 目標蛋白來源是細菌，菌體破碎高速離心得到粗提液。在用粗提液做疏水作用色譜時發(fā)現(xiàn)目標蛋白疏水性很強，洗脫時20mM的Tris都不能將明白蛋白洗脫下來，需要用超純水才可以。將疏水作用色譜純化用超純水洗脫下來的包含木蛋白的部分收集，超濾濃縮到1mL左右。由于疏水色譜純化的洗脫液幾乎全是超純水，所以添加20mM Tris（pH9.0），20mM NaCl，5%甘油，1mM PMSF（異丙醇溶解的100mM濃度的母液）。冰上平衡10分鐘后上樣做非變性蛋白電泳。蛋白電泳用37.5:1比例的膠配置，pH9.0。上層膠濃度為4%，下層膠濃度為6%。電泳初始20分鐘電泳為100V，之后電泳為300V，持續(xù)2h。電泳結(jié)束后，根據(jù)目標蛋白活性染色，發(fā)現(xiàn)目標蛋白停留在上樣槽底部，未進入膠體。如果將電泳儀的電極倒置后，則目標蛋白會進入電泳緩沖液。所以可以排除蛋白電荷的因素。是不是明白蛋白沉淀了�。空埜魑粚＜医o分析下吧，多謝啦！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
求調(diào)劑院校信息
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085600材料與化工306
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
286求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
328求調(diào)劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
一志愿北京化工大學(xué)070300 學(xué)碩336求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
286分人工智能專業(yè)請求調(diào)劑愿意跨考！
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
資源與環(huán)境 調(diào)劑申請(333分)
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
280求調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
269專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料學(xué)碩301分求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- Native非變性凝膠電泳，marker沒跑開。。
已經(jīng)有16人回復(fù)
- PCR-SSCP非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中的交聯(lián)度指的是什么？怎么計算？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 分子量接近，電荷接近的蛋白質(zhì)怎么分離開來？
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 如何處理后鹽酸胍變性的蛋白液，跑SDS-PAGE電泳。
已經(jīng)有5人回復(fù)
- “非變性膠電泳測定蛋白質(zhì)分子量”？慎用！
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 蛋白非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳沒有條帶
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求助關(guān)于非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳電泳液
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 為什么我的DNA 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 跑成這個鬼樣？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助】蛋白質(zhì)非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 請教為什么我的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳后條帶有些彌散！
已經(jīng)有9人回復(fù)
- DNA非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳所用loading buffer
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離DNA
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，染色問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【分享】新手上路 Western blot問題集合
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】非變性蛋白電泳用什么marker
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【原創(chuàng)】非變性凝膠電泳原理及應(yīng)用實例
已經(jīng)有48人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于8%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳的問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】有意思的rna非變性凝膠電泳-之真相大白
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 非變性蛋白電泳Marker哪里有賣
已經(jīng)有9人回復(fù)
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
專家經(jīng)驗: +248 - BioEPI: 73
- 應(yīng)助: 257 (大學(xué)生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19459.9
- 散金: 1704
- 紅花: 121
- 帖子: 6586
- 在線: 2777.4小時
- 蟲號: 856414
- 注冊: 2009-09-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
- 管轄: 微生物
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
cisong: 金幣+50, ★★★★★最佳答案, 應(yīng)該是你所說的那種情況，目標蛋白跟細胞壁連在一起了。謝謝大牛�。�！ 2014-12-14 18:21:03
cisong: 金幣+50, ★★★★★最佳答案, 應(yīng)該是你所說的那種情況，目標蛋白跟細胞壁連在一起了。謝謝大牛�。�！ 2014-12-14 18:21:03
| 疏水性大到只能用純水才能洗脫下來的蛋白質(zhì)也是能跑膠的，跑不進去可能是等電點太高，在pH9.0的時候不帶多少電荷就不動了。我也有一個蛋白質(zhì)在pH8.0幾乎不進膠的，正常。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
cisong3樓2014-12-10 01:25:33
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
專家經(jīng)驗: +248 - BioEPI: 73
- 應(yīng)助: 257 (大學(xué)生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19459.9
- 散金: 1704
- 紅花: 121
- 帖子: 6586
- 在線: 2777.4小時
- 蟲號: 856414
- 注冊: 2009-09-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
- 管轄: 微生物
5樓2014-12-14 15:47:26
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 cisong 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 資源與環(huán)境 調(diào)劑申請(333分) +5 | holy J 2026-03-21 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 廣西大學(xué)材料導(dǎo)師推薦 +3 | 夏夏夏小正 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 要好好無聊 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +4 | 上岸6666@ 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +3 | 哇呼哼呼哼 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22 350 本科985求調(diào)劑，求老登收留 +3 | 李軼男003 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +10 | 冷笙123 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南師大 070300（化學(xué)）304分求調(diào)劑 +3 | 0703武芊慧雪304 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +3 | 晨昏線與星海 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專業(yè)求調(diào)劑 +6 | hanamiko 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +5 | 冬十三 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 323求調(diào)劑 +3 | 洼小桶 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料求調(diào)劑，總分315（英一） +5 | sbdksD 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 中南大學(xué)化學(xué)學(xué)碩337求調(diào)劑 +3 | niko- 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 260求調(diào)劑 +3 | 朱芷琳 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程調(diào)劑 +9 | 大可digkids 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +5 | February_Feb 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +5 | 大米飯！ 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +6 | 拾光任染 2026-03-15 | 11/550 |
|