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關(guān)于高效液相色譜HPLC 梯度洗脫的問題 已有4人參與
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我有個(gè)樣品是用HPLC梯度洗脫 來進(jìn)行液相分析，但是配出來的流動(dòng)相在洗脫過程中的主峰出峰時(shí)間總是變化，比如說配了一瓶流動(dòng)相 出峰時(shí)間為35min，再配一瓶流動(dòng)相打樣的時(shí)候主峰出峰時(shí)間可能就變成了25min或45min。請教一下各位蟲友，這可能是什么原因？ 說明一下：1、我配制的流動(dòng)相A為磷酸二氫銨緩沖液，PH用磷酸調(diào)節(jié)為3.1，該緩沖液過濾后經(jīng)過超聲后使用。梯度洗脫的流動(dòng)相B為色譜乙腈。 2、在整個(gè)過程中其他條件都相同，比如所用儀器相同、柱溫相同、色譜柱相同，進(jìn)樣量、標(biāo)準(zhǔn)品相同、檢測波長相同。 |
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壓力、儀器都是正常的。就是換一瓶流動(dòng)相后出峰時(shí)間就有可能變化了。一開始我認(rèn)為是流動(dòng)相的PH有問題，但測定后PH基本相同，再說對于一種成品的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法來說，流動(dòng)相PH的略微變化應(yīng)該對主峰的出峰時(shí)間影響很小。 后來發(fā)現(xiàn)分析中心一分析員配出來的流動(dòng)相總是在40-45分鐘左右，而我重新按方法配出來的一般在30分鐘左右，所以我想是不是在溶解緩沖鹽的過程中是不是沒有溶解完全。請問一下，在流動(dòng)相配置的過程中緩沖鹽的濃度對出峰時(shí)間的影響？ |
4樓2014-11-26 08:51:03
yuecen
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
海浪016: 金幣+2, ★★★很有幫助 2014-11-26 08:59:43
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| 您的流動(dòng)相是偏酸性的，樣品出峰在25-45min之間，說明樣品在這個(gè)PH條件下比較敏感，或者說是正好在它的敏感點(diǎn)上，建議查查樣品的PKA或PKB的值，使流動(dòng)相的PH值跳出樣品的敏感范圍就好了。我猜您的樣品是有些偏酸性的，所以估計(jì)PH增加2-3個(gè)就好了，但那樣可能會(huì)造成樣品出峰靠前，如果您是做有關(guān)物質(zhì)不能滿足要求的話，就只好考慮換個(gè)流動(dòng)相啦 |
2樓2014-11-25 23:30:55
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3樓2014-11-26 08:14:32
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5樓2014-11-26 08:51:34
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