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請(qǐng)問(wèn)各位師兄師姐，
1.酶切時(shí)你們是水浴加熱還是用PCR儀保溫？
2.之前酶切的效果不好，我切了6個(gè)小時(shí)，現(xiàn)在可不可以延長(zhǎng)，比如12小時(shí)過(guò)夜？會(huì)不會(huì)使DNA講解了

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1樓 2014-12-08 10:51:10

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guoliwang

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一般用金屬浴(heating block)，比較方便。當(dāng)然水浴的溫度控制會(huì)更好。一般的酶最適條件1- 2小時(shí)足夠，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)容易產(chǎn)生非特異酶切。如果兩個(gè)酶的最適條件不一致造成酶切不成功，可以分兩次酶切，第一次酶切產(chǎn)物純化后再在最適條件進(jìn)行第二次酶切。

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慎思明辨博學(xué)篤行

4樓2014-12-08 12:59:58

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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-12-10 20:07:29

酶切的問(wèn)題，一是看選用哪家公司的酶，二是你是單酶切還是雙酶切；三是雙酶切的效率和星活性如何，用的什么Buffer；一般快酶buffer統(tǒng)一的；其余公司的不一樣的公司酶不一樣，NEB的酶是全世界最好的酶，但是貴。水浴金屬浴都可以，主要是你的儀器要控溫OKay。

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8樓2014-12-08 17:58:46

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Neo2000

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你用什么酶，體系怎樣？

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2樓2014-12-08 11:06:25

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林家女孩

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我們以前是用37℃水浴酶切，有過(guò)夜

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3樓2014-12-08 11:11:05

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wpwupingwp

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過(guò)夜切過(guò) 沒(méi)啥問(wèn)題用的takara的XhoI SphI

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南無(wú)觀世音菩薩

5樓2014-12-08 15:58:13

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5樓: Originally posted by wpwupingwp at 2014-12-08 15:58:13
過(guò)夜切過(guò) 沒(méi)啥問(wèn)題用的takara的XhoI SphI

我用的也是takara的酶，兩種酶的buffer完全不同，坑死，想著也只有延長(zhǎng)時(shí)間了，之前試過(guò)增加酶量效果一般

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6樓2014-12-08 16:12:25

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其實(shí)三十七度酶切一個(gè)小時(shí)效果也非常好。

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科研炮灰

7樓2014-12-08 17:09:41

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7樓: Originally posted by cckk_2000 at 2014-12-08 17:09:41
其實(shí)三十七度酶切一個(gè)小時(shí)效果也非常好。

這么快？

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9樓2014-12-08 18:34:28

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8樓: Originally posted by gangnoon at 2014-12-08 17:58:46
酶切的問(wèn)題，一是看選用哪家公司的酶，二是你是單酶切還是雙酶切；三是雙酶切的效率和星活性如何，用的什么Buffer；一般快酶buffer統(tǒng)一的；其余公司的不一樣的公司酶不一樣，NEB的酶是全世界最好的酶，但是貴。水浴 ...

takara的酶，雙酶切，在表上查到的雙酶切buffer對(duì)應(yīng)的兩種酶活性都不怎么樣，所以很捉雞啊

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10樓2014-12-08 18:35:48

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