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未成年的甘甘新蟲 (初入文壇)
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有木有關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)的文獻(xiàn)，細(xì)胞培養(yǎng)主要分為哪幾個(gè)期，每個(gè)期都有什么特點(diǎn)。 已有1人參與
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| 有木有關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)的文獻(xiàn)，細(xì)胞培養(yǎng)主要分為哪幾個(gè)期，每個(gè)期都有什么特點(diǎn)。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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復(fù)蘇 1. 從液氮中取出凍存的細(xì)胞，立即放到37℃的水浴鍋，輕微搖動(dòng)。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），取出噴點(diǎn)酒精置于超凈工作臺(tái)里。 2. 將細(xì)胞懸液吸到裝有10ml 培養(yǎng)基的15ml 離心管中（用培養(yǎng)基將粘在管壁上的細(xì)胞洗下來(lái)），1000轉(zhuǎn)離心5分鐘，把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動(dòng)，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。4. 標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。5. 3天換一次培養(yǎng)基。二、 傳代1. 培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。3. 加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細(xì)胞就行），消化1-2分鐘。4. 細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。5. 用移液槍吹打細(xì)胞，把細(xì)胞都懸浮起來(lái)。6. 把細(xì)胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。7. 倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來(lái)。8. 根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個(gè)，正常細(xì)胞傳3個(gè)。繼續(xù)培養(yǎng)。三、 凍存把細(xì)胞消化下來(lái)并離心（同上）。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來(lái)，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細(xì)胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過(guò)夜，然后放到液氮灌中保存。 凍存液的配制： 70%的完全培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。要注意的就是無(wú)菌操作！ |
2樓2014-12-19 10:23:54
3樓2014-12-26 15:19:57
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