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[求助]
油松蛋白提取 求助�。。。。。。。� 已有1人參與
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最近在提油松蛋白 但效果不理想 懇請高人指點(diǎn) (1)取-80℃凍存的油松針葉1g研磨成粉末（研磨時按其鮮重的10%加入水不溶性PVPP）； (2)加入3倍體積預(yù)冷的蛋白提取液Ⅰ（三氯乙酸10%，巰基乙醇0.07%，丙酮100ml），-20℃沉淀過夜； (3)4℃，10000rpm/min離心30min，棄上清，用3倍于沉淀體積預(yù)冷的蛋白提取液Ⅱ（巰基乙醇0.07%，丙酮100ml）將沉淀混勻，-20℃沉淀1h； (4)重復(fù)(3)，洗滌沉淀 3-4 次，至蛋白為純白色，棄去上清； (5)將沉淀冷凍干燥； (6)取0.1-0.2g干粉，加入2mL平衡酚和2mL SDS buffer（30%蔗糖，2%SDS，0.1mol/L Tris-Cl pH8.0，5%β-巰基乙醇）； (7)徹底渦旋，4℃，10000rpm/min離心3min，酚相被分開； (8)上層的酚相吸出，在酚相中加入至少5倍體積0.1mol/L冷醋酸銨甲醇溶液，-20℃沉降30 min； (9)4℃，10000rpm/min離心5min，再用冷醋酸銨甲醇洗沉淀兩次，80%丙酮洗兩次，沉淀冷凍干燥。 (10)將蛋白干粉加入裂解液，渦旋混勻，26°c水浴1h，離心，取上清。 提出的蛋白量很少 而且最后用裂解液溶液時 蛋白不易溶 不知是哪里有問題 望哪位大俠不吝賜教啊 �。。∪f分感謝�。�！ |
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3樓2014-12-30 15:19:43
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