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董董董小姐鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
求助�。。CR靈敏性實(shí)驗(yàn)~��！
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| 本人是做PCR的新手，現(xiàn)在正在做靈敏性實(shí)驗(yàn)，模板梯度稀釋老是稀釋不好，跑出的條帶要么明暗度不好，要么高濃度沒(méi)有條帶低濃度鈾條帶。。。糾結(jié)的不行。。。特來(lái)請(qǐng)教各位蟲(chóng)友，有沒(méi)有高手指點(diǎn)下，模板稀釋過(guò)程中要注意一那些細(xì)節(jié)哇~�。。。�！ |
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紅衛(wèi)大兵
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6樓2015-01-04 13:13:16
★ ★ ★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回貼交流 2015-01-07 22:49:18
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回貼交流 2015-01-07 22:49:18
| 樓主的模板是什么啊，如果是質(zhì)粒的話，你的梯度稀釋時(shí)還可以看到一個(gè)比較好的亮度梯度的，如果是gDNA的話，很多時(shí)候是稀釋度越高，PCR的效率越高，導(dǎo)致跑調(diào)帶的時(shí)候也越亮，當(dāng)然這個(gè)趨勢(shì)不是無(wú)限制的，但在一定濃度內(nèi)是這個(gè)樣子。建議樓主如果只是驗(yàn)證PCR體系靈敏度，與模板類(lèi)型無(wú)關(guān)的話，還是換成質(zhì)粒，效果好點(diǎn)。不過(guò)我是不太明白，現(xiàn)在靈敏度還是跑膠后用軟件ImageJ測(cè)光度嗎，那個(gè)人為影響太大了，如果有熒光PCR的話就準(zhǔn)確多了，當(dāng)然這只是我想的啊，希望能夠幫到你 |
7樓2015-01-05 10:04:35
★
董董董小姐(金幣+1): 謝謝參與
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2樓2015-01-04 11:07:48
★
董董董小姐(金幣+1): 謝謝參與
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3樓2015-01-04 11:29:45
★
董董董小姐(金幣+1): 謝謝參與
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4樓2015-01-04 11:33:47
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5樓2015-01-04 11:57:24
puresnowlqin
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8樓2015-01-05 15:34:00
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回貼交流 2015-01-07 22:50:03
董董董小姐: 金幣+5, 50ul原液是什么？？從哪來(lái)？？？ 2015-01-29 09:49:34
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回貼交流 2015-01-07 22:50:03
董董董小姐: 金幣+5, 50ul原液是什么？？從哪來(lái)？？？ 2015-01-29 09:49:34
| 模板先取50ul在10+90DDH2O梯度稀釋?zhuān)欢ㄒ靹颍灰�，我一般做兩條要稀釋1個(gè)小時(shí)，一定要混勻，量要準(zhǔn)，你要親眼看著它打完最后的一滴。第一個(gè)模板就從你稀釋時(shí)的50ul原液里取，別從1.5毫升EP管里取，不準(zhǔn)。 |
9樓2015-01-05 16:27:37
781055707
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10樓2015-01-05 17:00:46
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