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susannawsj

銅蟲(chóng) (初入文壇)

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[求助] 小分子量蛋白在pET28中表達(dá)有什么技巧？已有2人參與

我有兩個(gè)蛋白要在pET28中表達(dá)，分子量分別為4.3k和11.9k。我
的誘導(dǎo)條件是30度，160rpm，IPTG 1mM。0-12小時(shí)分別取樣，SDS-page都沒(méi)有條帶。
但同期表達(dá)的另兩個(gè)40和30k的都有很亮的帶？
我懷疑是誘導(dǎo)條件不合適；求各位大神指教~~

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1樓 2015-01-09 13:36:44

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joyva

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引用回帖:

3樓: Originally posted by susannawsj at 2015-01-10 15:59:49
我也用了Tricine-SDSPAGE, 但沒(méi)有條帶...

你是用新鮮配制R250染色液染膠嗎，我發(fā)現(xiàn)陳舊的染液很那染肽類

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5樓2015-06-10 10:01:33

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joyva

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susannawsj: 金幣+9, ★★★很有幫助 2015-06-01 11:14:20

不一定是沒(méi)表達(dá)哦，可能是蛋白太小而你跑膠有問(wèn)題，一般的SDS-PAGE很難觀察到，因?yàn)槟康牡鞍锥荚谧钕旅�，難以分辨出來(lái)。我在做一個(gè)6.7kD和4.5kD的，用tricein-page膠跑電泳

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2樓2015-01-09 22:12:16

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引用回帖:

2樓: Originally posted by joyva at 2015-01-09 22:12:16
不一定是沒(méi)表達(dá)哦，可能是蛋白太小而你跑膠有問(wèn)題，一般的SDS-PAGE很難觀察到，因?yàn)槟康牡鞍锥荚谧钕旅�，難以分辨出來(lái)。我在做一個(gè)6.7kD和4.5kD的，用tricein-page膠跑電泳

我也用了Tricine-SDSPAGE, 但沒(méi)有條帶

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3樓2015-01-10 15:59:49

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laojiu9878

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4樓2015-01-10 23:05:12

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