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永峰1230銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
重組質(zhì)粒 雙酶切鑒定 條帶大小問(wèn)題 已有1人參與
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連接轉(zhuǎn)化后 提取質(zhì)粒， 雙酶切鑒定， 如圖所示：10000marker， 質(zhì)粒，hind III 單酶切、XhoI 單酶切、 Hind III 和XhoI 雙酶切。 雙酶切之后在1000 bp處應(yīng)該有目的基因的條帶 1000 marker （10000、7000、4000、2000、1000、500、250）， 條帶 酶切的比 質(zhì)粒還要大�。�！ 雙酶切和 XhoI 單酶切 好像沒(méi)有區(qū)別，這是咋么會(huì)事呢？ 酶切鑒定.jpg |
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ptttmt
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從圖看，是試劑盒提的質(zhì)粒，質(zhì)量非常高，基本上都是超螺旋的。超螺旋的質(zhì)粒是跑的最快的，所以單酶切的質(zhì)粒比超螺旋質(zhì)粒跑的慢是正確的。但是Hind III單切泳道和超螺旋質(zhì)粒泳道相似，貌似Hind III單切泳道質(zhì)粒的量更大些，提示可能Hind III沒(méi)有切動(dòng)。雙酶切和Xho I單切，大片段理論相差1000bp，但這種差異在膠上是很難看出來(lái)的，由于雙酶切沒(méi)有切出1000的條帶，提示Xho I切開(kāi)了Hind III沒(méi)切開(kāi)。 綜合起來(lái)，Hind III酶沒(méi)切動(dòng)，可能是這個(gè)酶出問(wèn)題了。建議換一支Hind III酶，再仔細(xì)檢查下酶切緩沖液是否用對(duì)，同時(shí)注意雙酶切的2個(gè)酶是否能共用buffer的問(wèn)題。 另外，你酶切體系加的質(zhì)粒太多了，建議適當(dāng)減少。 [ 發(fā)自小木蟲(chóng)客戶端 ] |
2樓2015-01-15 06:55:24
永峰1230
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謝謝你，，我再試一試， Hind III 是新買(mǎi)的，應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題， 這兩個(gè)在http://www.thermoscientificbio.c ... st/?ca=doubledigest 網(wǎng)站上查過(guò)是可以 公用buffer的 ， 可能是你說(shuō)的 質(zhì)粒太多了 ，酶切動(dòng)，，我再做一次 |
3樓2015-01-15 10:58:42
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