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測序正確，但是酶切沒有條帶，而且重組質(zhì)粒位置不對 已有2人參與
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做連接轉(zhuǎn)化后，提取質(zhì)粒，沒有酶切或者pcr檢測直接送測序，片段2500bp，正向測序回來有900bp左右，比對后完全一樣。為了論文里面的圖片，重新進行酶切檢測，雙酶切后發(fā)現(xiàn)沒有插入片段，而且目的片段與質(zhì)粒加起來應該是8000bp左右，但是電泳結(jié)果竟然有15000，這是為什么呢？上樣的loading buffer為6 x，染料在buffer中，按比例添加loading buffer 染色顏色太淺，故多加了點loading buffer，這會對結(jié)果造成影響嗎？請高手們賜教！謝謝！ |
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biostar2009
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵回帖交流！ 2014-03-31 20:28:01
夏末憶雪: 金幣+5, ★有幫助 2014-04-19 23:03:27
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夏末憶雪: 金幣+5, ★有幫助 2014-04-19 23:03:27
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做個克隆，測序才測了一半不到就敢用了？還敢往論文里加。。。 你這個，目前聽你的描述，不知道是不是你的質(zhì)粒壓根沒有被切開，這種沒切開的質(zhì)粒，如果是超螺旋，會比大小小，要是成大圈了，就可以跑得很慢。 你先上一個沒有酶切的質(zhì)粒當control，看看你切了和沒切有沒有區(qū)別再說。 loading一般情況下無所謂。 |
2樓2014-03-31 20:16:21
3樓2014-04-01 00:12:43
4樓2014-04-18 16:51:01
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