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測(cè)序正確，但是酶切沒有條帶，而且重組質(zhì)粒位置不對(duì) 已有2人參與
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做連接轉(zhuǎn)化后，提取質(zhì)粒，沒有酶切或者pcr檢測(cè)直接送測(cè)序，片段2500bp，正向測(cè)序回來有900bp左右，比對(duì)后完全一樣。為了論文里面的圖片，重新進(jìn)行酶切檢測(cè)，雙酶切后發(fā)現(xiàn)沒有插入片段，而且目的片段與質(zhì)粒加起來應(yīng)該是8000bp左右，但是電泳結(jié)果竟然有15000，這是為什么呢？上樣的loading buffer為6 x，染料在buffer中，按比例添加loading buffer 染色顏色太淺，故多加了點(diǎn)loading buffer，這會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響嗎？請(qǐng)高手們賜教！謝謝！ |
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biostar2009
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-03-31 20:28:01
夏末憶雪: 金幣+5, ★有幫助 2014-04-19 23:03:27
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做個(gè)克隆，測(cè)序才測(cè)了一半不到就敢用了？還敢往論文里加。。。 你這個(gè)，目前聽你的描述，不知道是不是你的質(zhì)粒壓根沒有被切開，這種沒切開的質(zhì)粒，如果是超螺旋，會(huì)比大小小，要是成大圈了，就可以跑得很慢。 你先上一個(gè)沒有酶切的質(zhì)粒當(dāng)control，看看你切了和沒切有沒有區(qū)別再說。 loading一般情況下無所謂。 |
2樓2014-03-31 20:16:21
3樓2014-04-01 00:12:43
4樓2014-04-18 16:51:01
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