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測(cè)序正確,但是酶切沒(méi)有條帶,而且重組質(zhì)粒位置不對(duì) 已有2人參與
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做連接轉(zhuǎn)化后,提取質(zhì)粒,沒(méi)有酶切或者pcr檢測(cè)直接送測(cè)序,片段2500bp,正向測(cè)序回來(lái)有900bp左右,比對(duì)后完全一樣。為了論文里面的圖片,重新進(jìn)行酶切檢測(cè),雙酶切后發(fā)現(xiàn)沒(méi)有插入片段,而且目的片段與質(zhì)粒加起來(lái)應(yīng)該是8000bp左右,但是電泳結(jié)果竟然有15000,這是為什么呢?上樣的loading buffer為6 x,染料在buffer中,按比例添加loading buffer 染色顏色太淺,故多加了點(diǎn)loading buffer,這會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響嗎?請(qǐng)高手們賜教!謝謝! |
專家顧問(wèn) (正式寫(xiě)手)
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專家經(jīng)驗(yàn): +220 |
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做個(gè)克隆,測(cè)序才測(cè)了一半不到就敢用了?還敢往論文里加。。。 你這個(gè),目前聽(tīng)你的描述,不知道是不是你的質(zhì)粒壓根沒(méi)有被切開(kāi),這種沒(méi)切開(kāi)的質(zhì)粒,如果是超螺旋,會(huì)比大小小,要是成大圈了,就可以跑得很慢。 你先上一個(gè)沒(méi)有酶切的質(zhì)粒當(dāng)control,看看你切了和沒(méi)切有沒(méi)有區(qū)別再說(shuō)。 loading一般情況下無(wú)所謂。 |
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