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天使之名新蟲 (小有名氣)
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[求助]
有關(guān)總黃酮測定的問題
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在做總黃酮測定的試驗中,有幾個疑問,現(xiàn)請各蟲友們慷慨給予幫助!感激不盡! 1:摸索顯色條件,我用的是對照品摸索的,考察了一些因素,而且取的對照品的量都是1ml。主要因為我會覺得對照品做會比樣品穩(wěn)定,不知這樣做是否正確? 2:如今顯色條件已經(jīng)摸索完畢,正進行提取方式的考察,考察了超聲和冷凝回流兩種方式,發(fā)現(xiàn)超聲要優(yōu)于回流,但由于必須使提取方式盡量的簡單,于是不僅要減少提取次數(shù)盡量一次,而且最好將料液比也壓縮,時間也不要太長。但存在的問題有二:吸光度值最好要在0.3-0.7;提取后的殘渣保證基本無總黃酮存在,就是總黃酮的得率。今天試驗的時候根據(jù)前幾天的實驗總結(jié),我用料液比0.5:50超聲1h,過濾,全部濃縮至10ml容量瓶,提取溶劑考察的是60%乙醇提取,但復溶的時候用的是純甲醇(前面摸索顯色條件用的),是可以被純甲醇溶解10ml容量瓶中的,為了使吸光度值達到0.3-0.7的范圍,我在測定吸光度的時候取了4ml的樣品量再加顯色劑顯色,測定的吸光度就達到了0.9幾,顯然太大,我又突然想起做摸索顯色條件時用的對照品是1ml,而其他條件與摸索顯色條件是一樣的,這樣豈不是沒有達到平行?但吸光度既然增加了(樣品量增加),是不是又說明我的顯色劑還是過量的原因呢??然后參比溶液用的是不加顯色劑的樣品溶液,其實起的也是扣除顯色劑本身吸收的干擾的作用呢?? 3:原先實驗想采用超聲一次后補重直接取上清濾過測定的方式(更簡單),做了三次,有兩次超聲前后重量根本沒有變化,很奇怪?!還有就是這樣即使取了4ml的上清的量,測出來的吸光度值都沒有達到0.2,所以后面才采取了濃縮。 4:稱量的粉末量/最后定容的量是什么的濃度呢?樣品的濃度?生藥濃度?還是什么?如果補重了,再過濾濃縮的話,最后定容濃度又是怎么算的呢? 5:有關(guān)總黃酮測定,若大家有什么經(jīng)驗或好的建議,請多多指教。! 以上零碎的幾個在實驗中想到與碰到的問題,請各位有經(jīng)驗的蟲友們不吝賜教。∪f分感謝。。∈肿郊蓖郏。! |
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