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楊瑞雪金蟲 (小有名氣)
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[求助]
原核表達(dá)破碎后蛋白在沉淀里，以前都是在上清，是變成包涵體了嗎？
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各位大牛： 去年一直跟師姐做蛋白純化，按師姐的方法：將菌液以1:1000的比例加入到含有50mg/L Kana的LB培養(yǎng)基中，37℃170rpm搖床上過夜培養(yǎng)，次日，取這些初次活化的菌液以1:100的比例在含有Kana的LB培養(yǎng)基中（500ml）進行二次活化，培養(yǎng)2.5-3小時至生長對數(shù)中期（OD600=0.5~0.7）加入100μl 0.2mg/L的IPTG（1:5000），室溫150rpm繼續(xù)培養(yǎng)過夜，集菌，加入5ml裂解液混勻，超生破碎3'，停頓10'，250W，振幅60%，9min，之前SDS-PAGE檢測蛋白均在上清中，可是最近活化培養(yǎng)的菌再檢測都在沉淀里，其他基因的蛋白都在上清，就這一個出問題了，各位大神，我這是哪里出問題了？小妹好zao急的說。。。。。。另附膠圖如下：前兩個泳道是用別的實驗室的破碎儀，后兩個泳道是我們實驗室的破碎儀，最后的是代別人跑的，可以忽略。。。。。。  |
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楊瑞雪
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 955.9
- 散金: 2
- 帖子: 56
- 在線: 10.5小時
- 蟲號: 1843746
- 注冊: 2012-06-01
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2015-01-19 22:02:40
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3樓2015-09-05 09:20:39
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