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[求助] 發(fā)酵中噬菌體感染大腸桿菌已有5人參與

菌種：大腸桿菌
誘導(dǎo)前：未發(fā)現(xiàn)感染現(xiàn)象，菌種生長(zhǎng)良好
IPTG誘導(dǎo)兩個(gè)小時(shí)后：開(kāi)始出現(xiàn)菌體自溶現(xiàn)象，OD迅速下降，并降為0。
經(jīng)檢測(cè)：確定IPTG滅菌徹底。
求問(wèn)噬菌體感染原因。Ps：這種感染現(xiàn)象已經(jīng)連續(xù)出現(xiàn)很多次了，且每次噬菌體感染均出現(xiàn)在添加完IPTG兩個(gè)小時(shí)之后，每次都會(huì)用甲醛以及二氧化氯消毒。

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1樓 2015-01-22 10:02:43

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fjch2005

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laozuzunzhe: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流！ 2015-01-23 10:08:44
liutingting_: 金幣+1, ★有幫助 2015-01-24 11:25:22

你檢測(cè)確定是噬菌體嗎？
我倒是建議你先考慮一下IPTG的濃度問(wèn)題，是否過(guò)高，導(dǎo)致細(xì)菌死亡；

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2樓2015-01-22 14:45:01

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思凡

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liutingting_: 金幣+1 2015-01-24 11:25:29

建議你好好鏡檢一下，我贊同樓上的觀點(diǎn)，會(huì)不會(huì)濃度太高導(dǎo)致的菌體死亡

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3樓2015-01-22 16:21:41

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2樓: Originally posted by fjch2005 at 2015-01-22 14:45:01
你檢測(cè)確定是噬菌體嗎？
我倒是建議你先考慮一下IPTG的濃度問(wèn)題，是否過(guò)高，導(dǎo)致細(xì)菌死亡；

IPTG是0.3mmol/L，濃度是正常的誘導(dǎo)濃度

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4樓2015-01-23 10:16:56

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引用回帖:

4樓: Originally posted by liutingting_ at 2015-01-23 10:16:56
IPTG是0.3mmol/L，濃度是正常的誘導(dǎo)濃度...

你這個(gè)濃度是自己做實(shí)驗(yàn)做出來(lái)的還是參考的人家的文獻(xiàn)，我們經(jīng)梯度摸索，我們是0.2mM

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5樓2015-01-24 13:32:04

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5樓: Originally posted by 思凡 at 2015-01-24 13:32:04
你這個(gè)濃度是自己做實(shí)驗(yàn)做出來(lái)的還是參考的人家的文獻(xiàn)，我們經(jīng)梯度摸索，我們是0.2mM...

自己做出來(lái)的，謝謝

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6樓2015-01-24 14:04:26

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6樓: Originally posted by liutingting_ at 2015-01-24 14:04:26
自己做出來(lái)的，謝謝...

那你好好鏡檢下你的吧，所有的東西都滅菌徹底，IPTG濃度也合適，我們都好好的啊，從沒(méi)出過(guò)問(wèn)題，搞不懂了

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7樓2015-01-24 14:33:32

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用被污染的菌液做個(gè)噬菌斑實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)一下是不是噬菌體污染。如果污染了，光消毒還是不徹底的，用新的菌株吧。

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8樓2015-01-24 21:01:01

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我也有在加IPTG誘導(dǎo)后，大腸桿菌死亡，也找了很多原因，也做過(guò)鏡檢，也做過(guò)噬菌斑實(shí)驗(yàn)，最后是懷疑IPTG被污染了，我們IPTG濃度控制在0.2~0.4mm。你是如何檢測(cè)IPTG是無(wú)菌的呢？是不是加IPTG時(shí)污染了？

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9樓2015-01-25 15:28:19

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8樓: Originally posted by coffee159 at 2015-01-24 21:01:01
用被污染的菌液做個(gè)噬菌斑實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)一下是不是噬菌體污染。如果污染了，光消毒還是不徹底的，用新的菌株吧。

請(qǐng)問(wèn)是重新用新的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化即可嗎

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10樓2015-04-08 14:18:34

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