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新蟲 (初入文壇)

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專業(yè): 環(huán)境生物物理

[求助] qpcr溶解曲線問題已有1人參與

我把cDNA模板2倍稀釋，做了五個濃度梯度，然后用合成的基因引物做qpcr。用的是SYBR試劑盒。
得到的CT值不是應(yīng)該濃度增加一個數(shù)量級，CT值增加1嗎？比如濃度是1、2、4、8、16倍，CT值應(yīng)該是20、21、22、23、24.我用Actin做的時候是符合這個規(guī)律的，而到我自己做的基因的時候，得到的CT值一直是相近的幾個數(shù)，都是26左右。什么原因呢？
還有就是擴增效率怎么測？我做相對定量需要做這個嗎？

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附件 1 : gyf,_SYBR_Green,_01-23-2015,_14Hr_08Min.mxp

2015-01-26 15:22:16, 142.4 K

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一個關(guān)于qPCR標準曲線的問題。謝謝！已經(jīng)有12人回復
幫我看看這個溶解qPCR曲線已經(jīng)有6人回復

1樓 2015-01-26 15:31:17

已閱回復此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

飛約瘋?cè)嗽?/a>

專家顧問 (著名寫手)

科學怪人

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管轄: 分子生物

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

看了一下你的程序，建議你把Thermal Profile 改下，改成
1 Plateau
2 normal 2 step
3 Dissociation/Melt

贊一下

回復此樓

人生貴在行動，遲疑不決時，不妨先邁出小小一步。

2樓2015-01-26 17:28:07

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