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zxd95至尊木蟲 (著名寫手)
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[交流]
植物同源基因的表達(dá)模式分析問題探討 已有1人參與
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最近在植物中擴(kuò)增基因的ORF序列,測序后,發(fā)現(xiàn)同一基因存在2-4個(gè)不等的同源基因,有的同源基因之間僅存在1個(gè)堿基的差異;那么做基因表達(dá)分析時(shí),應(yīng)該怎樣設(shè)計(jì)引物?是讓同源基因差異堿基放在qPCR引物的3'端嗎?這樣是否可行,有沒有蟲友遇到同樣問題的?你們是怎么解決的,分享一下,謝謝!![]() ![]() ![]() ![]() |

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首先,你確定你的同源基因間只差一個(gè)堿基是克隆和測序造成的誤差還是實(shí)際真實(shí)存在呢?換句話說,如果發(fā)生這種情況,請(qǐng)多做幾個(gè)克隆并測序,確定是真實(shí)存在還是同一個(gè)基因結(jié)果被測了兩次。 如果真如LZ所說,那么實(shí)際qpcr會(huì)很難設(shè)計(jì)引物,對(duì)于這種高同源的基因,一般會(huì)選擇taqman 并且由公司設(shè)計(jì)合成,sybr green基本就是廢,分不出來。 |
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