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cslcslcsl金蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
DGGE切膠回收后有部分P不出條帶！急急急急求幫助！
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好不容易把DGGE做出了一張漂亮些的圖 就卡在回收上了。 DGGE前擴(kuò)16s rDNA V3區(qū)用的是HDA1-GC，HDA2，序列如下： HDA1-GC 5'-CGC CCG GGG CGC GCC CCG GGC GGG GCG GGG GCA CGG GGG GAC TCC TAC GGG AGG CAG CAG T-3' HDA2 5'-GTA TTA CCG CGG CTG CTG GCA C-3' 切膠是師兄幫忙切的，他之前經(jīng)驗(yàn)很豐富來(lái)著，表示沒(méi)見(jiàn)過(guò)我這種大批擴(kuò)不出來(lái)的情況。。 后面用的引物是HDA1和HDA2，序列如下： HDA1 5'-ACT CCT ACG GGA GGC AGC AG-3' HDA2 5'-GTA TTA CCG CGG CTG CTG GCA C-3' 切膠后用80微升的無(wú)菌水浸沒(méi)，4°隔了24h以上進(jìn)行的PCR，最怪的就是一共回收了48條帶，其中上面24條里大多數(shù)能擴(kuò)出來(lái)，但后面24條基本就沒(méi)東西了。但是DGGE圖上的條帶都是很分明的，量也差不多的樣子。PCR程序和之前用帶GC夾子的引物進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)的程序是一樣的。 還有一點(diǎn)最怪的是！marker對(duì)應(yīng)100bp以下那塊區(qū)域上，引物二聚體那條帶在所有PCR產(chǎn)物里特別明顯！！ 為什么會(huì)出現(xiàn)這種情況呢？？ 因?yàn)槲沂切率�，剛開(kāi)始半個(gè)月，本來(lái)不該著急的，但現(xiàn)在卡成這樣就差最后一步了，試劑公司測(cè)樣公司都快放假了，欲哭無(wú)淚。。求大家解答！ |
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金蟲(chóng) (初入文壇)
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2樓2015-02-04 21:23:06
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