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小豆芽_won銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助為什么PCR條帶比目的條帶大很多 已有3人參與
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| 在提取基因組后用設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行PCR，用的ExTaq酶，延伸時(shí)間是1分鐘。我的目的基因?yàn)?080bp而跑出的條帶比2000的MAKER也要大很多，但條帶不是很亮。想知道有哪些可能得原因。 |
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木蟲 (正式寫手)
小蟲
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2樓2015-03-26 13:09:13
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小豆芽_won: 金幣+10, ★★★很有幫助 2015-03-27 15:41:23
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小豆芽_won: 金幣+10, ★★★很有幫助 2015-03-27 15:41:23
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你這個(gè)問題先要搞清楚幾個(gè)前提： 第一，你所設(shè)計(jì)的引物是在基因組上還是cDNA上，如果在cDNA上，用基因組為模板PCR，中間如果有個(gè)內(nèi)含子，擴(kuò)增的片段就會比預(yù)期的要大； 第二，你擴(kuò)增出的這個(gè)片段是否測序，有可能是非特異性片段，建議引物在基因組數(shù)據(jù)庫做個(gè)BLAST比對，排除非特異性擴(kuò)增可能； 第三，可能是存在序列多態(tài)性，有些片段是可以移動(dòng)的，比如轉(zhuǎn)座子，我碰到過，中間插入一段或者缺失一段也可能導(dǎo)致這個(gè)現(xiàn)象，建議排查。 祝你好運(yùn) |
3樓2015-03-26 13:23:54
4樓2015-03-26 14:33:04
小豆芽_won
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5樓2015-03-27 15:24:29
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6樓2015-03-27 15:41:10
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7樓2015-03-27 15:41:46
8樓2015-03-27 17:36:16
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9樓2015-03-27 21:32:45
10樓2015-03-28 21:51:26
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