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露的想念新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
怎么才能把WB的內(nèi)參調(diào)齊��？大家交流一下。 已有2人參與
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| RT: 我是收完樣品之后，離心取上清，然后用BCA測(cè)濃度，之后使每個(gè)樣品的體積和濃度一樣，濃度大的用PBS補(bǔ)齊，加入相同體積的loading buffer，95度煮樣10min，我覺(jué)得我的方法沒(méi)問(wèn)題��？但是每次跑出來(lái)ACTIN 都不齊，很明顯，感覺(jué)很奇怪，難道是手法有問(wèn)題，大家?guī)臀曳治龇治霭�！多謝！ |
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7樓2015-03-29 13:24:41
sdu_max
銅蟲(chóng) (初入文壇)
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2樓2015-03-28 23:11:34
【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
露的想念: 金幣+50, ★★★很有幫助 2015-03-29 13:51:39
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如果你選擇生長(zhǎng)情況相同的細(xì)胞，無(wú)需測(cè)濃度，加相同體積的buffer以后直接煮樣品就可以了。 如果你表達(dá)某些影響細(xì)胞生長(zhǎng)的基因，你可以做一次不同梯度稀釋隊(duì)的western摸一下條件。例如我表達(dá)一個(gè)與細(xì)胞死亡相關(guān)的細(xì)胞時(shí)候，我會(huì)適當(dāng)增加WT的buffer量，稀釋W(xué)T細(xì)胞，達(dá)到平衡 |
3樓2015-03-29 12:37:28
露的想念
新蟲(chóng) (小有名氣)
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4樓2015-03-29 13:21:25
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