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1279341226新蟲 (初入文壇)
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[求助]
請(qǐng)分子生物學(xué)高手幫忙看看下面的PCR體系... 已有4人參與
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Each primer pair was used in 20 μl volume reactions containing 300 nM dNTPs (Eppendorf AG, Hamburg, Deutschland),1×DNA pol buffer (Biotools BandM labs S.A., Madrid, Spain), 3 mM MgCl2 (Biotools), 0.75 μ DNA polymerase (Biotools), 10 pmol each primer (depending on marker), and 10 ng of total DNA. 本人在用通用引物 LCO1498 and HCO2198 擴(kuò)寄生蜂線粒體基因 coi ，無(wú)奈老是做不出來，想按照文獻(xiàn)上別人的方法試試，可是體系怎么看不懂呢，括號(hào)后面的是生物公司還是某什么啊，我用的是TaKaRa 公司的酶( 5U/ μl )，10×PCR Buffer( with Mg2+ ) , dNTP Mixture（各 2.5 mM), 他們用的試劑可以在哪個(gè)公司訂到嗎？急！急��！急！！！ |
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7樓2015-04-07 08:38:17
18761615793
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
| 普通的Taq DNA聚合酶可能不能達(dá)到擴(kuò)增的效果，選酶還是很重要的http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html寫的挺好的，呵呵，我們都是用熱啟動(dòng)聚合酶，感覺很好，我現(xiàn)在也在找其他的酶，想嘗試高保真酶，或是能進(jìn)行長(zhǎng)片段PCR的，你的這個(gè)體系看不出有什么問題啊，你應(yīng)該把你的擴(kuò)增結(jié)果發(fā)上來，出現(xiàn)什么問題了，也許那樣解決會(huì)更好 |
8樓2015-04-07 11:21:23
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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2樓2015-04-03 23:07:46
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3樓2015-04-03 23:08:42
1279341226
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4樓2015-04-06 20:35:21
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5樓2015-04-07 04:12:39
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6樓2015-04-07 08:17:14
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9樓2015-04-07 17:10:51
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10樓2015-04-07 17:22:31
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