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mofashishe銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白相互作用問題 已有1人參與
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最近投稿一文章，陳述的是病原物的A蛋白與寄主的B蛋白相互作用的，在文中我提供了酵母雙雜交、BiFC（還有共定位）和免疫共沉淀的數(shù)據(jù)都表明了這兩個(gè)蛋白是可以相互作用的，但是評(píng)委一定要我補(bǔ)充promoter：GUS的數(shù)據(jù)證明寄主的B蛋白在病原物的侵染位點(diǎn)表達(dá)量提高。 我認(rèn)為如果這個(gè)寄主的B蛋白是一類組織特異性表達(dá)蛋白的話則需要提供promoter：GUS的數(shù)據(jù)，但是文中我已經(jīng)通過qPCR和WB證明了這個(gè)B蛋白是一類組成型蛋白，在所有組織中都有表達(dá)的，而且，也引用其他參考文獻(xiàn)證明該蛋白是在所有組織中表達(dá)的。 我想問問我想問問promoter：gus的數(shù)據(jù)在證明兩個(gè)蛋白之間的相互作用有什么意義的，病原物的蛋白與寄主的蛋白互作一定會(huì)提高該互作蛋白的表達(dá)的嗎？有誰遇見過這種問題，怎么破��？ |
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2樓2015-04-24 16:45:49
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3樓2015-04-24 16:58:20
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
mofashishe: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-04-24 17:40:51
mofashishe: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-04-24 17:40:51
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我覺的review的重點(diǎn)是通過相互作用引起B(yǎng)在特定作用位點(diǎn)表達(dá)上升，表明B的富集參與生物脅迫，而不是單純要再證明是否有相互作用發(fā)生，這是著眼于相互作用可能帶來的生理意義。你用三種方法做相互作用已經(jīng)很全面了。你的qPCR和WB只是證明B的整體水平上升，無法說明B是否高表達(dá)在AB作用部位。 至于AB相互作用是否引起B(yǎng)表達(dá)上升，這得看你的結(jié)果。同時(shí)，你應(yīng)該意識(shí)到的是，AB相互作用可能不直接引起B(yǎng)表達(dá)上升，但會(huì)讓B通過轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)集中在AB作用的細(xì)胞位點(diǎn)。 |
4樓2015-04-24 17:36:54
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非常感謝，你這樣說我就明白了，但是評(píng)委的原話是這樣說的“While the authors showed, using qPCR, that AtCYS is upregulated in response to infection by pathogen in root (Figure 5), there is no direct evidence that the interaction between UsCP and AtCYS takes place in the infection region. The activity of AtCYS promoter should be assayed in the infection region after pathogen parasitizing. ” 我理解為“但是A與B相互作用一定會(huì)促進(jìn)B的表達(dá)”沒有錯(cuò)吧？ |
5樓2015-04-24 17:49:31
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另外評(píng)委一直要我證明“Does the interaction between UsCP and AtCYS take place in the infection region?;” 這需要用什么實(shí)驗(yàn)來證明��？ 我的理解是用類似BiFC的方法在寄主上表達(dá)AtCYS-nYFP融合蛋白，在病原上表達(dá)UsCP-cYFP融合蛋白，然后讓病原物去侵染寄主，在觀察有沒有熒光產(chǎn)生。 我這樣的理解對(duì)嗎？但問題是我研究的這種病原物目前沒有轉(zhuǎn)化的技術(shù)，那應(yīng)該怎么樣讓病原物表達(dá)重組蛋白呢？ 而且目前我還真沒看見過有證明病原物的蛋白在寄主的侵染點(diǎn)中與寄主蛋白相互作用的直接證據(jù)的，都是使用其他體系來證明兩個(gè)蛋白相互作用的。 |
6樓2015-04-24 17:55:52
starseacow
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7樓2015-04-24 17:55:57
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8樓2015-04-24 17:59:45
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