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[求助]
擴(kuò)增片段大小約5Kb的cDNA片段 已有2人參與
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| 本人最近實(shí)驗(yàn)要擴(kuò)增一段約5Kb的cDNA（其中有1Kb左右GC含量比較高，約70%），試過(guò)各種酶都沒(méi)有效果（La taq， La with GC buffer, primer star， primer star GXL），請(qǐng)問(wèn)有擴(kuò)增 過(guò)這種片段的經(jīng)驗(yàn)的怎么解決？或者幫忙推薦哪個(gè)公司可以提供擴(kuò)增這種大片段的技術(shù)服務(wù)。謝謝�。。� |
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lixg
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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3樓2015-05-03 16:56:46
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-05-05 22:44:20
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-05-05 22:44:20
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我也遇到過(guò)這種情況，解決方案可能有兩個(gè)。一個(gè)是酶，曾經(jīng)用過(guò)takara的一種酶擴(kuò)增效率很高，但保真性沒(méi)有那么好。不記得全稱了，好像室友Amp這幾個(gè)字母，你可以查查，推薦一下。第二個(gè)是你的反應(yīng)體系和程序，引物多合成兩對(duì)，PCR程序多試試。另外，如果只是想得到序列不做下一步，建議分段擴(kuò)增。 基因克隆是個(gè)耐心活。祝順利。 |
2樓2015-05-03 16:00:46
5樓2015-05-03 21:14:25
6樓2015-05-03 21:14:51
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