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zuilinglong新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于5-race的問(wèn)題
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我使用的是clontech的5-race試劑盒，設(shè)計(jì)了3對(duì)引物，模板我加了90ul的TE緩沖液進(jìn)行稀釋，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中我使用的是普通的Ex tap酶，upm加的5ul，自己的特異性引物加了1ul，模板加了1ul。 擴(kuò)增過(guò)程中我篩溫度進(jìn)行的，58℃到68℃擴(kuò)第一輪，之后進(jìn)行巢式pcr，也是篩的溫度，加1ul的short和1ul的特異性引物。 擴(kuò)增結(jié)果是出現(xiàn)一條1000bp的帶，測(cè)序回來(lái)證明是單引物循環(huán)。并且除了這條帶其他的帶都是有時(shí)擴(kuò)增有有時(shí)擴(kuò)增沒(méi)有。 我該怎么辦��！求大俠給答案啊！ |
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zuilinglong
新蟲(chóng) (初入文壇)
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