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lvsecaihong銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
為什么我的聚丙烯酰胺染色條帶總是很暗 已有2人參與
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最近做聚丙烯酰胺凝膠染色后，條帶總是很暗，即便是膠顏色也不深。我染色的步驟是這樣的： 膠跑好之后，先用水沖洗一遍，然后一版膠用0.1g/100ml的硝酸銀染色，搖床搖15-20min，然后沖洗3遍，加1.5g/100ml的NaOH溶液，搖3min，加2/3瓶蓋的甲醛再搖7min，沖洗一遍。不知道為什么染的總是很淺，特別是條帶。跑膠時(shí)加樣都已經(jīng)加到10微升了，跑PCR時(shí)，DNA濃度100ng每微升左右，跑瓊脂糖凝膠的條帶比較亮，但不如Maker的條帶亮，PCR體系是上下游引物各1微升，10*buffer2微升，dNTP2微升，模板1微升，rTaq酶0.2微升，水12.8微升。片段300左右，PCR程序95度5min，（94度30s，Tm30s，72度30s，這三步循環(huán)35次）72度10min。望大神指導(dǎo) |
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2樓2015-05-17 12:49:36
lvsecaihong
銅蟲(chóng) (小有名氣)
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3樓2015-05-17 15:19:42
mataomatao
禁蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-18 12:54:35
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4樓2015-05-18 10:56:31
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