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Mike6514新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
RNAiso plus法提取構(gòu)巢曲霉RNA 已有1人參與
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各位大神求幫幫忙吧，提了快一個(gè)月的RNA了，用的是RNAiso plus法，提構(gòu)巢曲霉的RNA,一直沒(méi)有提出來(lái)過(guò)，我先說(shuō)說(shuō)我的試劑吧： （1）RNAiso PLUS （2）氯仿 （3）異丙醇 （4）75%乙醇（DEPC處理水配制） （5） RNase-free水（用DEPC水替代） （6）5mol/L的Nacl溶液和高鹽溶液（0.8mol/L的檸檬酸鈉和1.2mol/L的Nacl） 實(shí)驗(yàn)所用1.5ml離心管，槍頭用都用0.1% DEPC水浸泡后于120℃下高壓滅菌20分鐘以除去殘留的DEPC。實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中帶一次性手套，在超凈工作臺(tái)進(jìn)行，操作過(guò)程全程避免說(shuō)話。 實(shí)驗(yàn)操作： 1、將構(gòu)巢曲霉接種到鋪有玻璃紙的PDA培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)3d。 2.、用無(wú)菌的鑷子刮取菌絲，稱取0.2g菌絲體于研缽中，用經(jīng)過(guò)液氮預(yù)冷的杵子充分研磨，直至菌絲成粉末狀，立即進(jìn)行RNA抽提。 3、將粉末迅速轉(zhuǎn)移至加有1 ml TRIZOL 的2.0 ml離心管中，震蕩混勻，室溫下靜置5分鐘。 4、加入0.25 ml氯仿和0.25ml的5mol/L的Nacl溶液，劇烈震蕩混勻后，室溫下靜置5分鐘。 5、4℃、12000 r/min離心10min 6、取上清，至另一2.0 ml離心管中，加入等體積的異丙醇和等體積的高鹽溶液，（以后操作在冰上進(jìn)行）顛倒離心管數(shù)次混勻，-20℃放置15 min沉淀RNA。 7、4℃、12000 r/min離心10min 8、棄上清，加入75％乙醇1 ml洗滌沉淀（1-2次）。 9、4℃、12000 r/min離心5min 10、棄上清，將離心管置于超凈臺(tái)上自然揮干5 -8min。 11、 加入無(wú)RNase的雙蒸水20ul，55~60℃放置10min，溶解RNA，一70℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br /> 實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖（RNA的0.8%的瓊脂糖凝膠跑膠25min）: 做了五六次，提出的RNA都是這個(gè)結(jié)果，很是郁悶，求大神指點(diǎn) RNA的0.8%的瓊脂糖凝膠跑膠25min.jpg |
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2樓2018-04-23 14:49:13
J1663141418
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3樓2018-05-25 21:20:33
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