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zhangyep121銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
關(guān)于熱啟動(dòng)taq酶和逆轉(zhuǎn)錄酶相互抑制的問題
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| 親們，發(fā)揮大家想象力和智商的時(shí)候到了，我現(xiàn)在遇到一個(gè)PCR難題，跟大家討論一下，希望大家集思廣益，支支招，在做RNA類擴(kuò)增的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)錄酶對(duì)熱啟動(dòng)taq酶存在抑制作用，這一點(diǎn)已經(jīng)確認(rèn)了，目前發(fā)現(xiàn)，只有在taq酶和逆轉(zhuǎn)錄酶都有活性的情況下，才會(huì)抑制，taq酶只有在跟Mg2+接觸時(shí)，才有活性，也就是說，不遇到鎂離子，taq酶是不會(huì)受逆轉(zhuǎn)錄酶影響的，而50度逆轉(zhuǎn)錄期間，taq酶一旦具有活性，就會(huì)被體系中的逆轉(zhuǎn)錄酶搞，影響擴(kuò)增效果，但是50度時(shí)如果沒接觸到逆轉(zhuǎn)酶，即使在95度時(shí)加入逆轉(zhuǎn)錄酶，是不會(huì)影響擴(kuò)增效果的，也就是說逆轉(zhuǎn)錄酶失活后，不抑制taq酶，現(xiàn)在請(qǐng)問大家：如何使50度15分鐘逆轉(zhuǎn)錄階段，Mg離子，taq酶，逆轉(zhuǎn)錄酶，在一個(gè)體系中，卻又不相互影響？ |
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| 還有一個(gè)方法，你讓50度是Taq酶沒有活性不就好了，熱啟動(dòng)酶 熱啟動(dòng)嗎 必須溫度到達(dá)一定溫度才能啟動(dòng)，我們用的熱啟動(dòng)酶擴(kuò)增 都是95度激活十分鐘酶活才能啟動(dòng)啊，有很多其他的熱啟動(dòng)酶還有激活時(shí)間七十幾度的五十幾度的，你只要選擇95度才能激活的就能解決這個(gè)問題了 |
4樓2015-06-04 14:43:52
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10樓2015-06-05 15:05:40
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