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snowfling新蟲 (初入文壇)
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[交流]
環(huán)境微生物RNA提取 已有5人參與
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最近在提環(huán)境水體的RNA，采樣方法為將水體微生物過在濾膜上，然后放在RNA later中進(jìn)行保存。 提取過程使用了試劑盒和Trizol手工的方法，但是都出現(xiàn)了問題。 使用試劑盒時(shí)，在裂解液加乙醇溶解上柱的過程中出現(xiàn)了裂解液加乙醇分層的現(xiàn)象，感覺出現(xiàn)油狀物分層。 使用Trizol提取的時(shí)候，將濾膜放在Trizol中裂解，裂解完離心，之后Trizol就分為了兩層�，F(xiàn)象如圖所示~~ 初步問了很多人，大家都是是RNA later溶液導(dǎo)致的這種現(xiàn)象 然后RNA就一直提不出來。 不知道大家提RNA的時(shí)候有沒有遇到這種問題呢？出現(xiàn)之后提取效率會(huì)變低么？有沒有什么好的解決方法呢？ IMG_1219.JPG |
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chenfeng0823
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2樓2015-07-24 11:09:57
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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| 我也是從環(huán)境水體中提取RNA，也是先過濾在濾膜上然后提取。由于RNAlater會(huì)影響后續(xù)到RNA抽提，所以我有郵件問過TAKARA公司和 life technologies的人，都回復(fù)說建議先除去RNAlater后再進(jìn)行RNA抽提。我最后的處理辦法是每張濾膜上RNAlater只加20-50微升，這個(gè)量足以不使RNA分解，而又不會(huì)影響后續(xù)的試劑盒抽提或手工抽提（使用TAKARA公司的RNA試劑盒或和光制藥的ISOGEN進(jìn)行手工抽提都可以有效提取總RNA）。 |
3樓2015-09-16 13:49:47
ypan
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6樓2017-01-02 23:05:22
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