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snowfling新蟲 (初入文壇)
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[交流]
環(huán)境微生物RNA提取 已有5人參與
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最近在提環(huán)境水體的RNA，采樣方法為將水體微生物過(guò)在濾膜上，然后放在RNA later中進(jìn)行保存。 提取過(guò)程使用了試劑盒和Trizol手工的方法，但是都出現(xiàn)了問(wèn)題。 使用試劑盒時(shí)，在裂解液加乙醇溶解上柱的過(guò)程中出現(xiàn)了裂解液加乙醇分層的現(xiàn)象，感覺(jué)出現(xiàn)油狀物分層。 使用Trizol提取的時(shí)候，將濾膜放在Trizol中裂解，裂解完離心，之后Trizol就分為了兩層。現(xiàn)象如圖所示~~ 初步問(wèn)了很多人，大家都是是RNA later溶液導(dǎo)致的這種現(xiàn)象 然后RNA就一直提不出來(lái)。 不知道大家提RNA的時(shí)候有沒(méi)有遇到這種問(wèn)題呢？出現(xiàn)之后提取效率會(huì)變低么？有沒(méi)有什么好的解決方法呢？ IMG_1219.JPG |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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| 我也是從環(huán)境水體中提取RNA，也是先過(guò)濾在濾膜上然后提取。由于RNAlater會(huì)影響后續(xù)到RNA抽提，所以我有郵件問(wèn)過(guò)TAKARA公司和 life technologies的人，都回復(fù)說(shuō)建議先除去RNAlater后再進(jìn)行RNA抽提。我最后的處理辦法是每張濾膜上RNAlater只加20-50微升，這個(gè)量足以不使RNA分解，而又不會(huì)影響后續(xù)的試劑盒抽提或手工抽提（使用TAKARA公司的RNA試劑盒或和光制藥的ISOGEN進(jìn)行手工抽提都可以有效提取總RNA）。 |
3樓2015-09-16 13:49:47
ypan
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4樓2015-09-28 15:00:09
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