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朱振剛新蟲 (小有名氣)
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[交流]
提取質(zhì)粒出現(xiàn)雜條帶。
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大家好。我將我的目的片段3000bp 連入我的載體7000bp。連接方式是單酶切連接。載體經(jīng)過去磷酸化處理。提取質(zhì)粒后跑出來的電泳圖如圖所示。 提取質(zhì)粒之前已經(jīng)做過菌落PCR。所以這次是將菌落PCR得到的陽性菌進(jìn)行抽提質(zhì)粒。發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒的位置五花八門。有的比對照質(zhì)粒還要小。有的還有很多條帶。 不知道怎么回事。 第一道為7000bp對照質(zhì)粒。 捕獲.PNG |
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3樓2015-07-05 15:12:39
★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
朱振剛: 金幣+1 2015-07-05 17:04:27
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
朱振剛: 金幣+1 2015-07-05 17:04:27
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第一，質(zhì)粒電泳出現(xiàn)三條帶，很正常，最快的那條是質(zhì)粒超螺旋，中間的是質(zhì)粒本身，最慢的是質(zhì)粒的復(fù)制中間體。 第二，目的質(zhì)粒應(yīng)該是10000bp，我看第三泳道可以考慮測序下。 第三，不知道你菌落pcr用的是什么引物。單酶切一般引物是要用質(zhì)粒上的一條和目的基因上的一條引物進(jìn)行pcr反應(yīng)的。 第四，酶切之后可能馬上又自己連回去了，或者去磷酸化不完全，都是載體自連的可能原因。 第五，很前面的那條帶不知道是啥質(zhì)粒，會不會你的3000bp中有復(fù)制子，3000bp的自連了呢。或者，你的酶加多了，信號活性，亂切。 |
2樓2015-07-05 15:10:23
朱振剛
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4樓2015-07-05 17:08:04
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5樓2015-07-05 17:09:34
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