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其咕隆冬新蟲 (初入文壇)
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[求助]
水樣提取總DNA求助 已有4人參與
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| 想從采的地表水中提取總DNA，但是水樣中的微生物量應(yīng)該比較低，水樣也不是很多只有200多毫升。請問大神，要提取總DNA的話大概要用多少水？怎樣提取效率比較高？先37℃搖24小時，微生物量會增加么？ |
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2樓2015-07-09 21:00:03
lemian
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【答案】應(yīng)助回帖
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用0.2微米濾膜“抽濾”水樣即可。微生物會截留在濾膜上，濾膜要冷凍保存，用的時候在無菌操作臺里將濾膜剪成小碎片放入滅菌離心管待提取DNA。水樣如果用于提取DNA，采樣后需盡快過濾，如不能立即過濾，水樣應(yīng)冷藏，在幾小時內(nèi)完成過濾，所以你說培養(yǎng)是萬萬不行的。抽濾多少水要看情況，水體營養(yǎng)程度較低需多過濾些，較高可少過濾些。地表水一般情況下200 mL也是可以的，你過濾完以后提取下DNA，測下濃度，一般至少需要濃度在20 ng/uL以上，否則很難進(jìn)行下游實驗，例如PCR。你可以用試劑盒提取DNA，效率還是比較高的。建議你多看下相關(guān)文獻(xiàn)！ http://www.nature.com/ismej/jour ... l/ismej201529a.html |
10樓2015-07-11 14:56:13
3樓2015-07-10 13:16:11
fengjunchen
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6樓2015-07-11 11:58:01
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9樓2015-07-11 14:03:56
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