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其咕隆冬新蟲 (初入文壇)
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[求助]
水樣提取總DNA求助 已有4人參與
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| 想從采的地表水中提取總DNA,但是水樣中的微生物量應(yīng)該比較低,水樣也不是很多只有200多毫升。請問大神,要提取總DNA的話大概要用多少水?怎樣提取效率比較高?先37℃搖24小時,微生物量會增加么? |
木蟲 (著名寫手)
木蟲 (正式寫手)
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用0.2微米濾膜“抽濾”水樣即可。微生物會截留在濾膜上,濾膜要冷凍保存,用的時候在無菌操作臺里將濾膜剪成小碎片放入滅菌離心管待提取DNA。水樣如果用于提取DNA,采樣后需盡快過濾,如不能立即過濾,水樣應(yīng)冷藏,在幾小時內(nèi)完成過濾,所以你說培養(yǎng)是萬萬不行的。抽濾多少水要看情況,水體營養(yǎng)程度較低需多過濾些,較高可少過濾些。地表水一般情況下200 mL也是可以的,你過濾完以后提取下DNA,測下濃度,一般至少需要濃度在20 ng/uL以上,否則很難進行下游實驗,例如PCR。你可以用試劑盒提取DNA,效率還是比較高的。建議你多看下相關(guān)文獻! http://www.nature.com/ismej/jour ... l/ismej201529a.html |
銅蟲 (小有名氣)
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