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wildhui新蟲 (著名寫手)
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[求助]
熒光定量PCR標準品無明顯擴增！ 已有2人參與
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最近用Takara的一步法熒光定量TaqMan試劑盒（RR064A）檢測病毒，擴增病毒的引物的靈敏性和特異性及探針是別的實驗室驗證過的，引物和探針是英俊新和成的。可是不但標本無擴增，連標準曲線都擴增不明顯，標準品用的是體外轉(zhuǎn)錄的RNA，濃度1408ng/ul，通過公式計算出拷貝數(shù)后，10倍倍比稀釋，從10的12次方稀釋到10的0次方，然后分別取10的7次方到10的0次方的8個濃度及10的10次方到10的3次方的8個濃度，體系是20ul體系，反應(yīng)條件為stage1：（reps1 ）42℃ 15min，95℃ 10s，stage2：（reps40）95℃ 10s，60℃ 34s.擴增了好幾次，結(jié)果都類似。本人為新會員，沒有金幣給大家，請各位大俠幫我分析原因，萬分感謝��！萬分感謝�。D片如下： 標準品1 標準品1（濃度從10的10次方到10的3次方） 標準品1 標準品2 標準品2（濃度從10的7次方到10的0次方） 標準品2 |
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wildhui
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2樓2015-07-24 09:05:05
wildhui
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4樓2015-08-17 10:09:56
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