 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1784 | 回復(fù): 4 | ||
mahoumeimei金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
熒光定量PCR-絕對(duì)定量
|
|
最近想通過(guò)定量PCR來(lái)分析不同時(shí)期體系中目標(biāo)微生物的含量變化，主要是針對(duì)DNA做絕對(duì)定量。但看了一些資料后，有一點(diǎn)疑問(wèn)。 做絕對(duì)定量事先不是需要制備質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)做標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎。資料上是說(shuō)，通過(guò)克隆制備，提取出來(lái)的質(zhì)粒DNA通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定濃度，再根據(jù)質(zhì)量信息換算成目標(biāo)基因含量，再稀釋做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到目標(biāo)基因含量和Ct值的關(guān)系。 可是我不明白，既然通過(guò)測(cè)定樣品濃度就可以計(jì)算出目標(biāo)基因的含量，為什么還要多此一舉，做定量PCR呢？或者說(shuō)，定量PCR的意義不僅僅是這樣，但如果我的目的就是得到目的基因含量的話，其實(shí)是不需要做定量PCR的？ 新手學(xué)習(xí)中，希望大家給點(diǎn)建議。非常感謝！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有81人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 熒光定量PCR擴(kuò)增效率低
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 熒光定量PCR結(jié)果如何處理
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 關(guān)于熒光定量的問(wèn)題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 熒光定量pcr溶解曲線好幾個(gè)峰，但是電泳只有一條目的條帶，怎么回事
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 有做過(guò)熒光定量PCR的嗎？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 熒光定量PCR。。。求助求助
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 如何測(cè)定樣品中活體微生物數(shù)量？
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 熒光定量PCR擴(kuò)增效率怎么做？？？？我要被逼瘋了
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 熒光定量PCR cDNA怎么定量啊？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 相對(duì)定量PCR求助
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 熒光定量PCR與普通PCR產(chǎn)物不一樣？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 標(biāo)準(zhǔn)菌株建立熒光定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助】我這叫什么PCR呢？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】克隆-定量-測(cè)序，結(jié)果怪異
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】如何測(cè)定某一蛋白在不同組織的表達(dá)量？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于做熒光定量pcr的模板問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【分享】熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)指南（二）
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光定量pcr
已經(jīng)有11人回復(fù)
chenguestc
木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 7
- 應(yīng)助: 576 (博士)
- 貴賓: 0.4
- 金幣: 4526.9
- 散金: 1639
- 紅花: 176
- 帖子: 4708
- 在線: 353.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1337860
- 注冊(cè): 2011-07-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 作物分子育種
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
mahoumeimei: 金幣+2, 自己已經(jīng)想明白了，不過(guò)還是謝謝你的回復(fù): ) 2013-03-07 16:09:55
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-04-26 21:56:20
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
mahoumeimei: 金幣+2, 自己已經(jīng)想明白了，不過(guò)還是謝謝你的回復(fù): ) 2013-03-07 16:09:55
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-04-26 21:56:20
|
做絕對(duì)定量事先不是需要制備質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)做標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎。資料上是說(shuō)，通過(guò)克隆制備，提取出來(lái)的質(zhì)粒DNA通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定濃度，再根據(jù)質(zhì)量信息換算成目標(biāo)基因含量，再稀釋做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到目標(biāo)基因含量和Ct值的關(guān)系。 是的，需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線。 可是我不明白，既然通過(guò)測(cè)定樣品濃度就可以計(jì)算出目標(biāo)基因的含量，為什么還要多此一舉，做定量PCR呢？或者說(shuō)，定量PCR的意義不僅僅是這樣，但如果我的目的就是得到目的基因含量的話，其實(shí)是不需要做定量PCR的？ 你說(shuō)的方法可以，但是只是在同一時(shí)期時(shí)可以，因?yàn)槟銣y(cè)得總基因組的濃度。 在不同時(shí)期你要考慮時(shí)空表達(dá)問(wèn)題即不同基因在不同時(shí)期表達(dá)量不一致，即整個(gè)基因組的基因并不都是同一變化規(guī)律及速率，因此，定量PCR可以解決這個(gè)問(wèn)題。 |
2樓2013-03-07 09:47:25
402微笑的魚
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 32
- 帖子: 7
- 在線: 2.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 1615124
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專業(yè): 臨床獸醫(yī)學(xué)
3樓2013-03-26 11:04:39
將上之草
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 609
- 帖子: 6
- 在線: 14小時(shí)
- 蟲號(hào): 1979845
- 注冊(cè): 2012-09-06
- 專業(yè): 水產(chǎn)生物免疫學(xué)與病害控制
4樓2013-04-02 15:09:04
小孩5406
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 0.5
- 帖子: 82
- 在線: 23.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1986045
- 注冊(cè): 2012-09-08
- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
| “通過(guò)克隆制備，提取出來(lái)的質(zhì)粒DNA通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定濃度，再根據(jù)質(zhì)量信息換算成目標(biāo)基因含量，再稀釋做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到目標(biāo)基因含量和Ct值的關(guān)系�！边@里面忽略了一個(gè)問(wèn)題，就是你的檢測(cè)樣本也要進(jìn)行基因組的提取，然后才能作為模板進(jìn)行pcr定量。此時(shí)出現(xiàn)的一個(gè)問(wèn)題是，目標(biāo)基因含量和Ct值在一定范圍內(nèi)（即要對(duì)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屪鳛槟０澹┎拍芙⒕�性關(guān)系，從而確定樣本中目標(biāo)基因含量。另外之所以要進(jìn)行PCR，是因?yàn)樗缺稊?shù)放大了目標(biāo)基因的含量，從而提高了檢測(cè)的靈敏度。 |
5樓2016-01-08 16:15:58
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 mahoumeimei 的主題更新
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | Mqqqqqq 2026-03-19 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +6 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +10 | 冷笙123 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑 +12 | 墨墨漠 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +8 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料求調(diào)劑，總分315（英一） +5 | sbdksD 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 295復(fù)試調(diào)劑
+8
|
簡(jiǎn)木ChuFront 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 260求調(diào)劑 +3 | 朱芷琳 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑，是學(xué)校就去 +8 | sllhht 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考博] 申博26年 +3 | 八6八68 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程專碩求調(diào)劑 +10 | 慕寒mio 2026-03-16 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學(xué)材料工程專業(yè) 282分求調(diào)劑 +5 | 楓橋ZL 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 【同濟(jì)軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩306英一數(shù)二 +10 | z1z2z3879 2026-03-16 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +8 | 陌宸希 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研]
 0854，計(jì)算機(jī)類招收調(diào)劑
+3
|
胡辣湯放糖 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑 +3 | 我愛(ài)生物生物愛(ài)?/a> 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-14 | 3/150 |
|