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weizhi111至尊木蟲 (正式寫手)
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[求助]
怎樣提高融合蛋白表達(dá)量 已有6人參與
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| 在BL21菌株中誘導(dǎo)表達(dá)蛋白，用的是GST標(biāo)簽，做了幾次發(fā)現(xiàn)上清里面誘導(dǎo)的蛋白很少，掛柱洗脫后幾乎看不見條帶。沉淀（包涵體）蛋白還比較多。誘導(dǎo)條件試過(guò)IPTG 0.5mM 16度過(guò)夜，但I(xiàn)PTG 改成0.3mM 16度過(guò)夜后總體誘導(dǎo)表達(dá)量就減少了，上清沉淀都少，該怎么解決呢？最后蛋白是要用來(lái)測(cè)酶活的，所以誘導(dǎo)純化過(guò)程不能破壞酶活。請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)者幫助！ |
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 蛋白表達(dá)純化鑒定精華 |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 你可以從IPTG的濃度、誘導(dǎo)的溫度、誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)速以及誘導(dǎo)時(shí)間等條件進(jìn)行摸索，IPTG濃度過(guò)高會(huì)使得包涵體含量增加，BL21是大腸桿菌，最適溫度37℃，但是建議往下降溫度，溫度過(guò)高合成蛋白速率過(guò)快就有可能造成目的蛋白來(lái)不及正確折疊因而大部分形成包涵體，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)速過(guò)快也是是一樣。本人也是剛開始做，一點(diǎn)點(diǎn)小經(jīng)驗(yàn)可以參考一下。有時(shí)候你可以試著換換載體或者宿主細(xì)胞，表達(dá)量也會(huì)不同。我用過(guò)Transtta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞，表達(dá)量會(huì)比BL21高，只是我個(gè)人這樣，你可以試試。 |
10樓2015-08-04 14:45:57
wufeng1991
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2樓2015-08-02 21:32:35
weizhi111
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3樓2015-08-03 08:40:19
wufeng1991
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4樓2015-08-03 13:11:46
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