 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3597 | 回復(fù): 25 | |||
weizhi111至尊木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
|
[求助]
怎樣提高融合蛋白表達(dá)量 已有6人參與
|
||
| 在BL21菌株中誘導(dǎo)表達(dá)蛋白，用的是GST標(biāo)簽，做了幾次發(fā)現(xiàn)上清里面誘導(dǎo)的蛋白很少，掛柱洗脫后幾乎看不見(jiàn)條帶。沉淀（包涵體）蛋白還比較多。誘導(dǎo)條件試過(guò)IPTG 0.5mM 16度過(guò)夜，但I(xiàn)PTG 改成0.3mM 16度過(guò)夜后總體誘導(dǎo)表達(dá)量就減少了，上清沉淀都少，該怎么解決呢？最后蛋白是要用來(lái)測(cè)酶活的，所以誘導(dǎo)純化過(guò)程不能破壞酶活。請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)者幫助！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專(zhuān)輯推薦
 蛋白表達(dá)純化鑒定精華 |
» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有221人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 對(duì)轉(zhuǎn)基因的困惑----核酸代謝,經(jīng)濟(jì)利益,科學(xué)文化(轉(zhuǎn)載)
已經(jīng)有0人回復(fù)
ksws0465326
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 49 (小學(xué)生)
- 金幣: 885.4
- 紅花: 6
- 帖子: 124
- 在線: 74.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3263751
- 注冊(cè): 2014-06-09
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
weizhi111: 金幣+3, ★★★很有幫助 2015-08-04 14:44:17
weizhi111: 金幣+2, ★★★很有幫助 2015-08-05 07:57:09
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
weizhi111: 金幣+3, ★★★很有幫助 2015-08-04 14:44:17
weizhi111: 金幣+2, ★★★很有幫助 2015-08-05 07:57:09
| 像樓上說(shuō)的，不知道樓主搖菌轉(zhuǎn)速多少，太快也不好，我們實(shí)驗(yàn)室常用170rpm，我也做過(guò)幾次BL21的GST蛋白提取，加的時(shí)0.4mM的IPTG，30度3小時(shí)，回收量還不錯(cuò)，還有，根據(jù)培養(yǎng)基的組成不同，也會(huì)很大程度的影響蛋白產(chǎn)生量，比如，我回收TBP的時(shí)候，起初，用的培養(yǎng)基是Tryptone or polypeptone 5g，NaCl 1.25 g，NH4Cl 0.5g，KH2PO4 1.5g，Na2HPO412H2O 4.01g，up to 500ml, 取50ml培養(yǎng)回收，這時(shí)效率，上清大概是沉淀的50%（上清含量少），而后，我將培養(yǎng)基改成NaCl 0.5 g，NH4Cl 1g，KH2PO4 3g，Na2HPO412H2O 15g，up to 500ml；用時(shí)另外加入：1M MgSO4 1ml，2M Glucose 5.6ml，1% Vitamin B1(thiamine) 1ml，1M CaCl2 0.1ml。取50ml培養(yǎng)回收，反應(yīng)條件30度2-4小時(shí) OD600:0.4～0.8后加入IPTG，之后16度 24小時(shí)，回收TBP效率提高一倍。當(dāng)然這也只是我做的個(gè)例，不能保證適用于所有的蛋白，僅供樓主參考，可以考慮改變下培養(yǎng)基成分，祝樓主早日解決問(wèn)題。 |
7樓2015-08-03 20:13:41
ksws0465326
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 49 (小學(xué)生)
- 金幣: 885.4
- 紅花: 6
- 帖子: 124
- 在線: 74.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3263751
- 注冊(cè): 2014-06-09
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
20樓2015-08-05 08:29:55
wufeng1991
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 158.5
- 紅花: 1
- 帖子: 73
- 在線: 11.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3944706
- 注冊(cè): 2015-06-29
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
14樓2015-08-04 20:24:44
wufeng1991
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 158.5
- 紅花: 1
- 帖子: 73
- 在線: 11.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3944706
- 注冊(cè): 2015-06-29
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
2樓2015-08-02 21:32:35
weizhi111
至尊木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 11475.9
- 散金: 158
- 紅花: 1
- 帖子: 722
- 在線: 123小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2144809
- 注冊(cè): 2012-11-24
- 專(zhuān)業(yè): 昆蟲(chóng)學(xué)
3樓2015-08-03 08:40:19
wufeng1991
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 158.5
- 紅花: 1
- 帖子: 73
- 在線: 11.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3944706
- 注冊(cè): 2015-06-29
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
4樓2015-08-03 13:11:46
zxfeffie
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 13.1
- 帖子: 5
- 在線: 1.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4003612
- 注冊(cè): 2015-08-03
- 專(zhuān)業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
5樓2015-08-03 15:27:26
cs冰凝
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 53.5
- 帖子: 9
- 在線: 2.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1373181
- 注冊(cè): 2011-08-19
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
6樓2015-08-03 18:56:24
weizhi111
至尊木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 11475.9
- 散金: 158
- 紅花: 1
- 帖子: 722
- 在線: 123小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2144809
- 注冊(cè): 2012-11-24
- 專(zhuān)業(yè): 昆蟲(chóng)學(xué)
8樓2015-08-04 14:40:04
weizhi111
至尊木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 11475.9
- 散金: 158
- 紅花: 1
- 帖子: 722
- 在線: 123小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2144809
- 注冊(cè): 2012-11-24
- 專(zhuān)業(yè): 昆蟲(chóng)學(xué)
9樓2015-08-04 14:44:03
生物小猴子呢
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 帖子: 1
- 在線: 1.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3745238
- 注冊(cè): 2015-03-17
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 你可以從IPTG的濃度、誘導(dǎo)的溫度、誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)速以及誘導(dǎo)時(shí)間等條件進(jìn)行摸索，IPTG濃度過(guò)高會(huì)使得包涵體含量增加，BL21是大腸桿菌，最適溫度37℃，但是建議往下降溫度，溫度過(guò)高合成蛋白速率過(guò)快就有可能造成目的蛋白來(lái)不及正確折疊因而大部分形成包涵體，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)速過(guò)快也是是一樣。本人也是剛開(kāi)始做，一點(diǎn)點(diǎn)小經(jīng)驗(yàn)可以參考一下。有時(shí)候你可以試著換換載體或者宿主細(xì)胞，表達(dá)量也會(huì)不同。我用過(guò)Transtta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞，表達(dá)量會(huì)比BL21高，只是我個(gè)人這樣，你可以試試。 |
10樓2015-08-04 14:45:57
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 weizhi111 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 蘆lty 2026-03-25 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 總分293求調(diào)劑 +4 | 加一一九 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工328分調(diào)劑 +6 | 。，。，。，。i 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0854AI CV方向招收調(diào)劑 +4 | 章小魚(yú)567 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料277求調(diào)劑 +4 | min3 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 李李不服輸 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +6 | 元夕元 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +6 | 奶油草莓. 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +5 | plum李子 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0856材料專(zhuān)碩353求調(diào)劑 +6 | NIFFFfff 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 13853210211 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿華東理工大學(xué)081700，初試分?jǐn)?shù)271 +5 | kotoko_ik 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 384求調(diào)劑 +3 | 子系博 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 工科0856求調(diào)劑 +5 | 沐析汀汀 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +12 | 申子申申 2026-03-19 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 妮妮ninicgb 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料 271求調(diào)劑 +5 | 展信悅_ 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 白QF 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 353求調(diào)劑 +3 | 拉鉤不許變 2026-03-20 | 3/150 |
|