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feiadafeng銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
大腸桿菌培養(yǎng)出現(xiàn)嚴(yán)重問題，緊急求助 已有8人參與
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最近實(shí)驗(yàn)室搖菌出現(xiàn)下列問題，不知道是否為噬菌體，希望有經(jīng)驗(yàn)的諸位能夠給出一些建議。 1. 在相同的培養(yǎng)箱當(dāng)中，同時(shí)進(jìn)行小管搖菌，一些管子明顯不生長(zhǎng)，或生長(zhǎng)緩慢。培養(yǎng)基相同，抗生素相同，單菌落來自用已確定序列的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的BL21。 2. 在相同培養(yǎng)條件下，進(jìn)行200-1 L培養(yǎng)時(shí)，初期生長(zhǎng)沒有問題。OD達(dá)到0.45-0.8左右進(jìn)行誘導(dǎo)。平行3或4瓶時(shí)會(huì)出現(xiàn)一瓶16度24小時(shí)OD只到0.9左右，或OD到2或3但收菌時(shí)上清有絮狀物浮沫。所有培養(yǎng)基、瓶子都已滅菌，IPTG已用.22微米濾膜過濾，取樣測(cè)OD時(shí)同時(shí)在開放環(huán)境或超凈臺(tái)中取樣于離心管中。 3. 采用TB表達(dá)時(shí)，5000g以下轉(zhuǎn)速收集的菌體呈現(xiàn)偏綠褐色的豆腐渣狀態(tài)，無法集中在瓶底，而且明顯OD值很低。已知實(shí)驗(yàn)室相同菌株在相同條件下表達(dá)，菌體會(huì)呈現(xiàn)黃色或淡紅褐色狀態(tài)。 上述情況在多瓶或多管表達(dá)時(shí)尤其明顯，但并非是所有樣品都會(huì)出現(xiàn)上述情況。而且所有大量表達(dá)的實(shí)驗(yàn)在誘導(dǎo)前生長(zhǎng)狀態(tài)良好，似乎不是菌株自帶污染。 希望大家能提供一些經(jīng)驗(yàn)，謝謝！ |
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| 我以前做蛋白表達(dá)純化時(shí)也遇到這種情況，我的是溶菌了，注意操作（尤其是平板） |
9樓2015-08-24 11:05:29
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