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feiadafeng銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
大腸桿菌培養(yǎng)出現(xiàn)嚴重問題，緊急求助 已有8人參與
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最近實驗室搖菌出現(xiàn)下列問題，不知道是否為噬菌體，希望有經(jīng)驗的諸位能夠給出一些建議。 1. 在相同的培養(yǎng)箱當中，同時進行小管搖菌，一些管子明顯不生長，或生長緩慢。培養(yǎng)基相同，抗生素相同，單菌落來自用已確定序列的質粒轉化的BL21。 2. 在相同培養(yǎng)條件下，進行200-1 L培養(yǎng)時，初期生長沒有問題。OD達到0.45-0.8左右進行誘導。平行3或4瓶時會出現(xiàn)一瓶16度24小時OD只到0.9左右，或OD到2或3但收菌時上清有絮狀物浮沫。所有培養(yǎng)基、瓶子都已滅菌，IPTG已用.22微米濾膜過濾，取樣測OD時同時在開放環(huán)境或超凈臺中取樣于離心管中。 3. 采用TB表達時，5000g以下轉速收集的菌體呈現(xiàn)偏綠褐色的豆腐渣狀態(tài)，無法集中在瓶底，而且明顯OD值很低。已知實驗室相同菌株在相同條件下表達，菌體會呈現(xiàn)黃色或淡紅褐色狀態(tài)。 上述情況在多瓶或多管表達時尤其明顯，但并非是所有樣品都會出現(xiàn)上述情況。而且所有大量表達的實驗在誘導前生長狀態(tài)良好，似乎不是菌株自帶污染。 希望大家能提供一些經(jīng)驗，謝謝！ |
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