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愛起點(diǎn)新蟲 (初入文壇)
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PCR產(chǎn)物大小比引物距離大很多，什么原因
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如圖，最左邊是DL500maker，最上面是500pb，間隔100bp嗎，maker右邊三個(gè)是三個(gè)引物P出來以后的結(jié)果，第一條不太明顯，大概450bp左右，第二個(gè)有兩條帶，第三個(gè)大概400bp左右，現(xiàn)在的問題是，我用的NCBI在線設(shè)計(jì)的引物，三個(gè)引物的產(chǎn)物大小應(yīng)該是145bp，138bp，172bp，現(xiàn)在pcr產(chǎn)物的大小明顯大很多，這是什么原因，請(qǐng)各位大俠多多指教。 1.jpg |
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| 可能是你引物設(shè)計(jì)不太正確，方便給一下序列么？ 導(dǎo)致擴(kuò)出來的PCR產(chǎn)物不是你想要擴(kuò)增的目的基因。至于中間第二泳道出現(xiàn)了兩條帶，只能說明，你的產(chǎn)物不純。第一條帶沒有說明你要么點(diǎn)樣出了問題，要么是你的PCR引物不正確，導(dǎo)致不能擴(kuò)增出產(chǎn)物。第三條帶不那么清晰，可能是聚合酶加少了或者是聚合酶活性較低，或者是dNTP的量過少等等。終其原因，最好先重新設(shè)計(jì)一下引物，然后一步步重新認(rèn)真做！祝君成功！ |
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9樓2015-08-29 21:20:12
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