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嗎子金蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
做質(zhì)粒重組的蟲(chóng)友們請(qǐng)看這
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小弟最近一直在構(gòu)建載體，用的是限制性酶切克隆，之前已順利構(gòu)建了一個(gè)載體。 但是最近將另一個(gè)基因連接于表達(dá)載體上的時(shí)候，目的基因已經(jīng)獲得并已純化，表達(dá)載體也切開(kāi)并純化了， 連接的時(shí)候換了各種連接比例，但結(jié)果一直是連接不上（用的TAKARA的T4連接酶），已經(jīng)連續(xù)近三個(gè)月失敗，幾近奔潰。亦被老板嫌棄多次。。。 在查了一些資料及請(qǐng)教了一些前輩之后，他們建議選擇其他克隆方式，比如無(wú)縫連接(In-Fusion Cloning),好像還有相應(yīng)的重組KIT。 我也打算試試了，不能一棵樹(shù)上吊死啊。 現(xiàn)抽空發(fā)帖與各位做重組的蟲(chóng)友們交流討論，做得好的，希望大家分享寶貴經(jīng)驗(yàn)；和我一樣苦逼做不出來(lái)的也希望互相學(xué)習(xí)，都是為了試驗(yàn)順利。  關(guān)于質(zhì)粒重組的好方法希望大家多多發(fā)表下寶貴意見(jiàn)吧。50金幣大家不要嫌少。。。。 |
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假大空
木蟲(chóng)之王 (文學(xué)泰斗)
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7樓2015-09-02 16:51:21
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嗎子(金幣+1): 謝謝參與
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 本帖僅樓主可見(jiàn) |
2樓2015-09-02 16:24:17
★
嗎子(金幣+1): 謝謝參與
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3樓2015-09-02 16:28:28
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嗎子(金幣+1): 謝謝參與
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4樓2015-09-02 16:30:08
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嗎子: 金幣+1 2015-09-05 20:39:04
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5樓2015-09-02 16:37:35
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6樓2015-09-02 16:45:40
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8樓2015-09-02 16:52:17
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9樓2015-09-02 16:53:07
chenyuanxmc
金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
嗎子: 金幣+5 2015-09-05 20:39:23
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
嗎子: 金幣+5 2015-09-05 20:39:23
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插入片段和載體的濃度稍微大點(diǎn)進(jìn)行連接，后期用pcr篩選，祝順利 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
10樓2015-09-02 16:57:41
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