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轉(zhuǎn)化子菌落PCR正確，但是菌液提取重組質(zhì)粒一直提不到是什么原因？ 已有6人參與
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最近做質(zhì)粒重組，轉(zhuǎn)化子菌落PCR正確，有目的條帶，但是條帶不是很亮的那種，然后挑取轉(zhuǎn)化子菌液培養(yǎng)，抗生素的濃度足夠高，提取質(zhì)粒，總是在第三步十分鐘離心之后，上清液都有些渾濁，離心力足夠大，時(shí)間足夠長(zhǎng)繼續(xù)提取檢測(cè)，都沒有提取到質(zhì)粒。試劑盒沒有問題，因?yàn)橥D(zhuǎn)化的載體質(zhì)粒能提取出來。 急求各位有遇到類似問題的給出寶貴的意見，不勝感激。 |
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4樓2015-09-04 05:06:59
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3樓2015-09-03 15:54:37
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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三樓四樓說的是對(duì)的，但也不一定。用目的基因的引物PCR，假陽性的條帶比陽性條帶要淡，這點(diǎn)還是能區(qū)分出來的。牙簽點(diǎn)菌的時(shí)候別戳到培養(yǎng)基上，只在菌落表明粘一下就好。 另外，你提取質(zhì)粒的方法操作有問題，中和后離心，上清液不會(huì)渾濁，即使菌體量沒裂解完全大也不會(huì)。你好好對(duì)照分子克隆手冊(cè)或者試劑盒說明書看，自己究竟哪一步有問題。這種問題都不用師兄師姐演示的，因?yàn)樘?jiǎn)單了，說白了就是你操作問題。 |
6樓2015-09-05 17:21:39
7樓2015-09-06 07:52:46
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9樓2015-09-06 11:22:36
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10樓2015-09-06 12:18:31
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